重磅|氨探生物肠道微生物代谢组高通量筛查数据库获专利授权

 Step 1-标准品数据库构建流程： 

1.1 根据目前国际上认可的且应用广泛的代谢物公共数据库（如HMDB、KEGG、SMPDB及METLIN等）选取目前已经有文献报道、且在生物样本（血、尿、组织等）中已经被定性且定量检测到的肠道微生物相关代谢物作为候选目标代谢物购买相对应的高纯度标准品；

1.2 根据标准品极性的不同确定标准品的最佳稀释溶剂（甲醇、异丙醇、DMSO等）配制标准品溶液，并将配置好的标准品溶液于-80℃条件下保存，用于构建数据库的标准品溶液浓度控制在2-5mg/ml即可；

1.3 将肠道微生物相关代谢物标准品的稀释液经高分辨质谱联用仪，分别在正离子和负离子模式下，优化质谱采集方法，实现一次进样同时完成6种不同能量10、20、30、40、50、60eV的CE碰撞能量下产生一级和二级谱图的采集，确保不同性质的标准品均被成功建库，使得化合物的碎片和谱图库更为完整和丰富；

1.4 将肠道微生物相关代谢物的标准品混合溶液经C18和HILIC分离体系进行超高效液相色谱洗脱检测，获取肠道微生物相关代谢物的保留时间，并录入质谱数据库，完成标准品的构建流程。 

· Step 2-数据库验证流程： 

2.1 标准品数据库原始文件与新建数据库的匹配其实相当于一种“自证”的过程，源于标准品原始文件的数据库，再去对标准品进行注释，可以检查建库过程中原始文件和谱图导入有无失误，其次可以检查数据库的质量；

2.2 基于不同类型生物样本的数据库验证流程，是对每次更新的标准品数据库的最终考量。数据库最终是服务于项目的，不同类型生物样本代谢物鉴定数量的稳定提升才是数据库不断更新的最终目标。

· Step 3-数据库注释流程：

3.1 根据目前国际上认可的且应用广泛的代谢物公共数据库（如HMDB、KEGG、SMPDB及METLIN等）对这些肠道微生物相关代谢物进行通路注释；

3.2 全面的收集、整理肠道微生物相关代谢物的信息包括中文名称、英文名称、分子式、CAS号、代谢物生物类别、代谢物类别亚类、mol文件、HMDB ID、KEGG ID、ChemSpider ID、Pubchem ID、SMILES、Description等，将上述信息录入mzvault建库系统中新建的质谱数据库，对验证后的质谱数据库进行全面人工注释。

经上述3个流程（图2），最终构建得到了经过严格验证的405种肠道微生物相关代谢物注释质谱数据库；该数据库还支持多种格式导出如.txt、.msp、.db、.csv等，适用于多种代谢组学分析软件基于本谱图库进行比对；本数据库也将开发html网页格式，用于代谢物快速查找。

图2 肠道微生物相关代谢物质谱数据库建立、验证及注释标准流程