热点应用丨基于HILIC模式的SCION（赛里安）LC6000高效液相色谱仪对稀少糖的测定

2023-07-18 19:42:48, 天美色谱天美仪拓实验室设备（上海）有限公司

前言

FOREWORD

稀少糖是自然界中数量较少的糖，可以通过酶法生产。稀少糖通常用作低脂低卡食品中高热量糖的替代品。此外，稀少糖被认为可以减缓消化后血糖水平的升高，从而抑制内脏脂肪的积累。在商业食品中，这种稀少糖的使用越来越受欢迎。本文使用SCION LC6000高效液相色谱仪开发了一种亲水作用液相色谱（HILIC）技术对L-核糖、D-阿洛酮糖、木糖醇、D-塔格糖、D-阿洛糖和L-葡萄糖进行检测和完全分离的方法。HILIC是一种利用极性固定相和流动相（包含水和更少极性的溶剂，如乙腈）的一定比例的色谱技术。

实验部分

EXPERIMENTAL PART

仪器

采用包含以下模块的SCION（赛里安）LC6000高效液相色谱仪系统：

▪ 集成六通道真空脱气的SCION LC6100四元泵

▪ SCION LC6210 高精度、低残留自动进样器

▪ SCION LC6310 立式柱温箱

▪ SCION LC6460 RI示差检测器

液相色谱条件

▼ 表1. 方法参数

试剂及标准品

REAGENTS AND STANDARDS

标准品以水：乙腈（1:1）为溶剂稀释，浓度范围为0.01%至0.5%。优化了三种不同的流动相组成，结果显示流动相优化对于稀少糖分离至关重要。

结果

RESULT

示例图谱

流动相1（水/乙腈20:80）分析0.5%稀少糖校准标准时获得的色谱图，见图1。如图1所示，当流动相设置为20:80的水/乙腈时，木糖醇和D-塔格糖没有分离，如峰3和4所示。

▲ 图1. 0.5%稀少糖在（水/乙腈20:80）体系中的色谱图

然后，使用（水/乙腈15:85）分析相同的校准标准品（0.5%）。通过增加乙腈的浓度分离木糖醇和D-塔格糖，分析获得的色谱图见图2。通过增加乙腈与水的比例，木糖醇和D-塔格糖的分离仅略有改善，但并未完全分离所有六种稀少糖。

▲ 图2. 0.5%稀少糖在（水/乙腈15:85）体系中的色谱图

进一步调整流动相，加入甲醇溶剂。最终组成为水/乙腈和甲醇，浓度分别为5:75:20%，分析获得的色谱图见图3。

▲ 图3. 0.5%稀少糖在（水/乙腈/甲醇 5:75:20）体系中色谱图

标准曲线

流动相加入甲醇成功地分离了所有六个目标化合物，对每个目标分析物制作了校准曲线，图4显示了稀少糖的校准曲线。除了D-阿洛酮糖，所有其他目标化合物的线性度均为0.9999，D-阿洛酮糖的R²值为0.9998。

▲ 图4. 稀少标准曲线

样品

为了检验该方法在真实样品中的可行性，使用相同的方法（水/乙腈/甲醇 5:75:20）体系，分析了一种商业化稀少糖的糖浆，参考标准中还包括果糖和半乳糖。

将0.1g糖浆加入一个含有2.5mL超纯水的试管中。搅拌溶解后加入2.5mL HPLC级别的乙腈。轻轻摇动后，将混合物通过0.45µm的膜过滤。然后将5µL的样品注入LC6000高效液相色谱仪，分析获得的色谱图见图5。通过比较上面两个色谱图，可以看出使用（水/乙腈/甲醇 5:75:20）体系可以成功地分离稀少糖。