Givosiran的非临床药代动力学及吸收、分布、代谢和排泄，第一个被批准的N-乙酰半乳糖胺偶联RNA干扰治疗药物

所有的动物实验都是按照当地、州和联邦法规进行的，并得到了Alnylam制药公司动物护理和使用委员会的批准。对雄性和雌性大鼠、食蟹猴进行Givosiran单次静脉注射或单次和多次皮下注射给药，剂量水平在每项研究中规定。开始给药时，大鼠约7~12周龄，体重160~325g。猴为2至8岁，体重为2至6公斤。大鼠和猴静脉注射剂量为10mg/kg，大鼠皮下注射剂量为1~10mg/kg，猴皮下注射剂量为1~30mg/kg。收集血浆、尿液、乳汁、粪便和其他组织(肝脏、肾脏等)样本，冷冻保存在约-70°C以待分析。

通过液相色谱-高分辨质谱法(LC-HRMS)对Givosiran的代谢物进行分析，并对Givosiran原药及其主要代谢物AS(N-1)3''Givosiran进行定量分析，AS(N-1)3''Givosiran是一种双链代谢物，由反义链3''端失去一个核苷酸形成，分析方法同之前工作。简单地说，根据制造商推荐的方案，使用Clarity OTX 96孔板(Phenomenex, Torrance, CA)对血浆、尿液、乳汁、粪便匀浆和组织匀浆进行固相萃取处理，提取的样品通过LC-HRMS进行分析。

图1 大鼠单次皮下给药(10mg/kg)后，Givosiran(A)和AS(N-1)3′Givosiran(B)的个体和平均(±sd)血浆浓度-时间曲线。Givosiran和AS(N-1)3′Givosiran血浆Cmax值分别为1.06和0.190μg/ml。Givosiran和AS(N-1)3′Givosiran血浆AUClast值分别为3.00和0.626h·μg/ml。AUClast评估的AS(N-1)3’Givosiran的血浆暴露约为Givosiran暴露的21%。在达到Cmax后，Givosiran和AS(N-1)3’Givosiran浓度分别以t_1/2值3.0和8.2h下降。注:误差条表示sd定量下限=10ng/ml。低于定量浓度下限的按0处理。结果显示为单个动物(开放符号)和平均值(封闭圆圈;N=3)。

图2 单次皮下注射Givosiran(30mg/kg)后，雄性猴Givosiran(A)和AS(N-1)3''Givosiran(B)的个体和平均(±sd)血浆浓度-时间曲线。血浆中Givosiran和AS(N-1)3′Givosiran的Cmax值分别为2.42和1.67μg/ml。Givosiran和AS(N-1)3′Givosiran血浆AUClast值分别为26.4和19.4h·μg/ml。AUClast评估的AS(N-1)3’Givosiran的血浆暴露量约为Givosiran暴露量的74%。在达到Cmax后，Givosiran和AS(N-1)3’Givosiran浓度分别在5.5和5.1h的t_1/2值下降。注:误差条表示sd定量下限=10ng/ml。结果显示为单个动物(开放符号)和平均值(封闭圆圈);N=3)。

图3 静脉给药和皮下给药(10mg/kg)后大鼠的平均肝脏浓度-时间分布。单次静脉或皮下给药后，Givosiran的肝脏AUClast值分别为5390小时·µg/g和12600小时·µg/g。单次皮下给药10mg/kg后肝脏暴露量显著高于静脉给药，表明皮下给药后肝脏吸收更有效。IV,静脉注射;SC,皮下。误差条表示每个时间点每组4只动物。

图4 静脉给药和皮下给药(10mg/kg)后大鼠平均肾浓度与时间曲线的关系。单次静脉或皮下给药后，Givosiran的肾AUClast值分别为5440小时·µg/g和3190小时·µg/g。静脉给药后较高的血浆浓度导致肾脏中较高的Givosiran浓度，Givosiran从血浆中的分布可能是被动扩散(即没有asgpr介导的摄取)。IV,静脉注射;SC,皮下。误差条表示每个时间点每组4只动物。

图5 静脉给药(10mg/kg)和皮下给药(1-10mg/kg)后，猴的平均肝脏浓度-时间分布。单次皮下给药(1、5或10mg/kg)，在给药后672-1008小时的肝脏中可检测到Givosiran，在给药后8至24小时观察到最大肝脏浓度。单次静脉或皮下给药10mg/kg后，肝脏AUClast分别为4220小时·µg/g和28500小时·µg/g。单次皮下给药后肝脏AUClast比相同剂量静脉给药后高约7倍，表明皮下给药后肝脏摄取比静脉给药更有效。IV,静脉注射;SC,皮下。每个时间点每组N=2只动物。