Jupiter™系列色谱柱的最新应用分享——鱼精蛋白，鲑鱼降钙素，艾塞那肽缓释微球等的HPLC分析

硫酸鱼精蛋白是从鱼类新鲜成熟精子中提取出来的一组碱性多肽的硫酸盐，由多种富含氨基酸的肽段组成，由于其带有的强正电荷可与肝素分子中维持抗凝活性的负电荷结合，形成稳定复合物，从抗凝血酶-Ⅲ（antithrombine-Ⅲ, AT-Ⅲ）置换出肝素，阻碍肝素AT-Ⅲ复合物的形成，阻止AT-Ⅲ构象发生改变，降低抗Xa因子活性，减弱Xa因子的灭活，促使凝血功能恢复，从而起到拮抗肝素活性的作用。目前国内市场上的硫酸鱼精蛋白主要是从鲑科和鲱科鱼种中提取制得。2020年版《中华人民共和国药典》中对该品种的质量控制较为简单，现有的鉴别方法不能对不同来源的样品进行鉴别，未收载有效的理化方法对含量及纯度进行控制。为保证该品种的质量和疗效，需要建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白含量和纯度的HPLC方法，并采用质谱对不同鱼种来源的硫酸鱼精蛋白中的肽段进行了氨基酸序列分析，为该品种的质量控制提供参考。

鲱科、鲑科来源鱼精蛋白肽段氨基酸序列质谱鉴定结果和其详细的LC-MS分析方法我们将在后续文章中详细探讨。

中山大学药学院·广东省高校创新药物制剂工程技术研究中心的吴涵，陈龙楷等老师分享了典型的一种鲑鱼降钙素的HPLC检测方法。降钙素（calcitonin, CT）是一种由甲状腺的滤泡旁细胞分泌的含有32个氨基酸的直线型多肽类激素，作用于破骨细胞从而降低血钙浓度，主要用于高血钙症及绝经期骨质疏松等疾病的治疗。临床使用的主要是合成人降钙素（human calcitonin, hCT），以及其类似物鲑鱼降钙素（salmon calcitonin, sCT）、鳗鱼降钙素（elcitonin）等，其中sCT活性是hCT活性的20~40倍。目前已上市的鲑鱼降钙素制剂有注射剂和鼻喷剂，注射剂为侵入性给药，患者顺应性较差；鼻喷剂虽然为非侵入性给药，但长期使用对鼻黏膜具有刺激性，易引发鼻黏膜炎、打喷嚏、头痛等不良反应，且生物利用度低。鲑鱼降钙素肺部给药具有优于其他非注射给药途径的生物利用度。作者自主研发了鲑鱼降钙素混悬型气雾剂，为了更好地评价该制剂，建立了高效液相色谱(HPLC)法测定其中鲑鱼降钙素含量。

该方法的精密度，稳定性，重复性和加样回收率实验，均得到了全面的验证。

潍坊市中医院临床药学科的王冠杰老师分享了最新的艾塞那肽缓释微球体外释放度HPLC分析方法。艾塞那肽是人工合成的exendin-4，为肠促胰岛素类似物^[2]，由39个氨基酸残基组成，有促进胰腺β细胞增殖、改善β细胞功能，及促进胰岛素分泌、增加机体对胰岛素的敏感性和延缓胃排空等作用。由于其半衰期短，其上市产品为每日2次注射剂。为了提高糖尿病患者用药的顺应性，利用生物可降解且无毒副作用的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）将艾塞那肽药物制成微球，不仅能提高药物生物利用度、增强疗效，还具有缓释、靶向作用，减少药物的服用量，减少服药次数^[5]。微球的体外药物释放度试验是药物微球质量控制的关键项目，是药物制剂质量控制的重要手段之一。本实验是对已制备的艾塞那肽缓释微球在规定的测试条件（温度、释放介质等）下试验，确定药物的体外释放条件，并通过其方法学验证，确定分析方法的科学性、可行性及耐用性。