2023-05-09 19:09:57, 产品市场部 月旭科技(上海)股份有限公司
(图片来源:包图网)
高效液相色谱法(HPLC)因其选择性高、灵敏度高、分析速度快,已成为现代分离测试的重要手段。色谱柱作为高效液相分离系统中的重要环节,色谱柱的类型决定色谱系统的性质,色谱柱的粒径和长度影响分析时间和分析效率。
在液相色谱分析中,使用较多的分离模式是正相色谱分离模式和反相色谱分离模式,正相色谱和反相色谱怎么区分,适用范围是哪些,今天小编就和大家聊一聊。
01 正相色谱
正相色谱(NPC)是采用极性固定相(如带有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅胶等),流动相通常使用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂,如烃类溶剂,或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、四氢呋喃、乙腈等),以调节流动相的洗脱强度。是一种根据目标物的极性差异将其分开的液相色谱技术。
划重点:正相色谱=固定相极性>流动相极性
一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。
● 在正相色谱中,样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用,与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱,在柱内停留比较长的时间。
● 反之,极性较弱或非极性分子与硅胶之间产生相对较弱的相互作用,比较容易被洗脱,因而在柱内停留的时间较短。组分的分配比K值,随其极性的增加而增大,但随流动相中极性溶剂的极性增大(或浓度增大)而降低。
● 同时,固定相的极性越大,组分的保留值越大。
因此,正相色谱可以根据目标物的极性差别而达到分离目的。
在正相色谱分离中,可通过薄层色谱法(TLC)选择合适的流动相。
正相色谱常用的四种固定相,极性大小顺序是:
硅胶>氨基>二醇基>氰基
正相色谱的适用范围:
1)适合用于分离异构体;
2)适用于绝不溶于水的化合物;
3)适用于分离在反相色谱中不保留或极性较强的化合物,比如生物碱、核苷酸类、有机酸等。
02 反相色谱
反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相,极性有机溶剂、水溶液为流动相,根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。
● 反相色谱的固定相大多是在硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。
● 在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。
● 样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱保留更强,后出峰。
划重点:反相色谱=固定相极性<流动相极性
反相色谱常用的固定相种类有:
C18、C8、C4、C3、C1、苯基、C30、PFP等。
反相色谱主要应用于相对分子质量低于5000,特别是1000以下的弱极性和非极性小分子物质的分析和纯化,如蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物质。
作者:李丽君
排版:林哥
审核:露露
如果您想了解更多内容,欢迎联系月旭科技销售人员或拨打400-810-6969服务热线,我们将竭诚为您服务。
04-12
技术分享 | 一文了解物理吸附与化学吸附的含义与异同04-12 安东帕康塔
展会预告|与您相约 CIBF@重庆04-12
行业应用 | 如何利用滤光箔片拓展的密度计测量光固化样品04-12 Anton Paar China
邀请函 | 安东帕MCR流变仪用户培训会_北京04-12
国产光谱仪器与应用技术研讨会在海光公司成功召开04-11
海光邀您参加第十七届中国科学仪器发展年会(ACCSI 2024)04-11
让数据可控可计量 | 广电计量正式立项《数据资源控制及资产辨认的计量要求》团体标准04-11
质谱成像前沿探秘:专访再帕尔·阿不力孜教授与贺玖明研究员04-11 飞飞
邀您相聚金陵,聚焦合成生物学前沿分析技术04-11
环丙基的妙用大盘点:别只知道是麻醉剂!04-11
【邀请函】默克与您相约济南CPQC04-11
精美礼品等你来领!默克色谱柱使用者福利来啦04-11
爱色丽彩通x琅世 | 共启饰面行业色彩标准化新篇章04-11 爱色丽彩通
以旧换新 | eXact 2系列便携式色差仪产品升级优惠!04-11 爱色丽彩通
展会预告 | 爱色丽彩通诚邀您莅临2024 CHINAPLAS04-11 爱色丽彩通
直播报名 | eXact2新测量技术及应用场景全览04-11 爱色丽彩通
华西口腔岛津合作实验室:先进技术全面支持 口腔医学卓越发展04-11 分析测试百科网
又是杂质?岛津药物杂质综合分析方案来了!04-11 分析中心
就在明天 | Oi Service直播讲堂:如何选择合适的AFM力学探针04-11