霸气！又一篇CELL被这个流式包了

2023-04-17 17:42:47, 陈老湿德国赛多利斯集团

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种负义单链RNA病毒，和流感一样，属于季节性传播流行病，且在免疫系统较弱/老人等易感人群中更为严重。

它的跨膜蛋白主要有融合蛋白(F)、黏附蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)，其中：F蛋白主要被用于开发RSV疫苗，F蛋白的疫苗产生的抗体在动物模型中的保护机制与抗体的以下性质有关：

抗体类型，比如IgG1, IgG2, IgG3, IgA, IgM
Fc效应功能：抗体依赖性中性粒细胞吞噬作用（ADNP）：抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCP）抗体依赖性补体沉积（ADCD）
Fc受体亲和力

近日美国Ragon研究所Galit Alter团队和Janssen疫苗公司在Cell上发表了题为 Antibody effector functions are associated with protection from respiratory syncytial virus 的研究论文^[1]，对接种Ad26-RSV-preF（表达RSV 融合前F蛋白的腺病毒疫苗）注射人体前后特异性抗原诱导的抗体特征与效应做了全面分析。

这篇文章中抗体分型、多种Fc受体结合、ADCC、ADCP和ADCD均使用了来自赛多利斯的iQue® 高通量流式细胞仪。

图1：本篇文章Methods中，iQue®出现的频率非常高

图2：使用iQue® 检测抗体分型，ADNP、ADCP、Fc受体结合示意图。

一般先把抗原（疫苗）固化在自带荧光的磁珠中，与血清中的抗体结合，然后与针对不同亚型抗体结合（抗体分型），或被效应细胞吞噬（ADCP、ADNP），或与Fc受体结合（Fc受体亲和力）

53名成年人被随机分配成疫苗组和安慰剂组。疫苗接种后28天的F特异性结合抗体大幅度增加。通过iQue® 高通量流式细胞仪检测，疫苗组的F特异性IgG1和IgA、中和抗体、ADCD、ADCP和抗体依赖性NK细胞激活（ADNKA）的反应显著提高。

图3：与安慰剂组相比，疫苗组28天的各种类型的抗体、Fc受体活性等显著上升

在疫苗接种28天后进行攻毒实验，疫苗组症状比较轻，对比受保护组和不受保护组的抗体特征和效应，iQue® 高通量流式细胞仪得到的数据又有大发现。

图4：与不受保护组相比，受保护组 F特异性ADCP诱导抗体水平升高，F特异性FcgR2b结合增强，以及F特异性IgA1抗体水平增强。

既然Fc受体结合活性如此重要，研究人员突变了RSV抗体palivizumab，使得Fc受体结合能力增强，在小鼠实验中证明了具有增强Fc功能的抗体在体内具有更优秀的抗RSV效果。

iQue® 高通量流式细胞仪的优势在于：

高通量速度快：最快5分钟即可完成一块96孔板检测，最快20分钟即可完成一块384孔板检测；如本文一共53份血清，需要在多个时间点检测不同指标，仅Fc受体就有12种，算上重复，有大几千个样品，所以需要一种高通量的流式细胞仪来进行测定，所以舍iQue® 其谁？
操作简便：混匀-测定即可，一般不需要连续清洗
节约样品：最少仅需几微升样品，节约靶标抗原和珍贵细胞
软件强大：可以输出IC50，EC50，热图和透视图，标准曲线指定和浓度检测等，还有专门的高通量分析模块对多块样品板同时分析

除本篇CELL之外，还有多篇CNS同样使用iQue® 做了类似的应用：