不可不知，反相流动相该如何选择
2023-03-24 12:16:28, 上海应用部 月旭科技
（图片来源：包图网）
在HPLC中，流动相是纯溶剂或者混合溶剂以及带有固体改性剂的溶剂。色谱工作者可以针对HPLC的不同应用在数百种溶剂中进行选择。溶剂的选择要考虑诸多因素，如溶剂的粘度、折射率、腐蚀性、透明度等，还有商业价格。流动相的溶剂强度或有机溶剂百分比可控制分析物的保留时间。
什么是流动相
流动相是使分析物通过色谱柱的溶剂。分析物存在于适当的溶剂中，在样品制备后注入色谱柱系统。该溶剂不被视为新基质，因为它不会干扰分析。可以在样品制备过程中选择分析物的载体的性质，以满足特定要求，例如挥发性和与HPLC中流动相的混溶性。在反相色谱柱中，流动相比固定相更具极性。一般来说极性流动相是首选，因为分离效果表现出更好的重现性。
分析物在流动相中的溶解度在色谱柱中也起着重要作用。对于溶于水或部分水性溶剂的化合物，选择反相HPLC不是问题，但对于不溶于极性溶剂的化合物，通常需要使用正相色谱柱。样品极性，固定相极性和流动相极性的评估对于色谱柱的选择也很重要。
流动相的一般选择要求
纯度
所有溶剂都应该具有最高的纯度和质量。HPLC级溶剂经过预过滤和纯化，在紫外线下具有最小的吸光度。因此，他们不含会在色谱图基线中产生假峰的杂质。缓冲液制备中使用的水具有最高纯度。去离子水通常含有痕量有机化合物，因此不推荐用于HPLC。
粘度
为了保持可接受的压降（＜2500psi）和合理的流过HPLC色谱柱的流速，流动相粘度应尽可能低。较低粘度的流动相产生狭窄的色谱峰。例如乙腈通常是反相HPLC的首选溶剂，因为它不仅粘度低于甲醇或异丙醇，而且具有良好的保留特性。
沸点
如果涉及样品回收，沸点很重要，低沸点溶剂更容易从样品中去除。
无腐蚀性
溶剂必须对HPLC系统组件无腐蚀性。
混溶性
并非所有HPLC溶剂都可混溶。如果混合了不能混合的溶剂可能会导致一些问题，例如不稳定的基线，波动的压力等。异丙醇可与大多数常见的HPLC溶剂混溶。因此，在不确定最后使用的溶剂系统的情况下，它可以用来冲洗HPLC的流路。
作者：储绍权
排版：蔡根花
审核：夏微微
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