2023-02-08 12:19:30 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
在制药产业,mRNA治疗方法作为个体化治疗方案,在新冠疫苗研发以及肿瘤免疫治疗方面具备非常大的发展潜力和应用前景。然而由于mRNA疗法会受到大量RNA酶的降解,从而使mRNA的稳定性受到影响。为了改善mRNA的效率和稳定性,阻止5''核酸酶降解mRNA,现在已经创建了各种帽分子来维持珍贵mRNA序列的生物学稳定性。通过多种制剂形式将mRNA序列用于人体,包括脂质纳米颗粒(LNP)和腺相关病毒(AAV)。在Covid 19疫苗开发期间,很多mRNA的疫苗强调了这种新兴治疗方式。5''帽的多样性和完整性的分析表征对于分子稳定性和给药安全至关重要。在以下应用中,将1250个核苷酸的mRNA寡核苷酸链用RNase H酶消化,并进样到BioZen 2.6µm Oligo色谱柱中。我们以HPLC方法匹配高分辨率质谱法(HRMS),以区分多种帽子及其相对完整性。
HPLC条件
HRMS条件
图1 mRNA 帽纯度分析
信使RNA(mRNA)的poly A尾是腺苷的重复序列(A),它是疫苗和基因疗法开发人员中常见的开发形态。在3''端,该尾巴长度的增加为“核心”序列提供了额外的稳定性,该序列可保证细胞核中mRNA的稳定和细胞质中mRNA的降解,调配mRNA与核糖核蛋白的结合以及随后的宿主免疫反应。鉴于mRNA稳定性的挑战以及当前递送方式的挑战,了解poly A尾降解的情况是改善治疗的重要方式。在此应用中,使用RNase H酶酶解了1250个核苷酸的mRNA寡核苷酸链,然后将其进样到BioZen 2.6µm Oligo中。我们证明了HPLC和高分辨率质谱法(HRMS)区分自然降解的聚A尾的能力。
HPLC条件
HRMS条件
图2 总离子流图中的单核苷酸分辨率:
Poly A Tail<5ppm.
图3 mRNA Poly A尾长度与相应保留时间
艾杰尔-飞诺美助力各级实验室分析方法开发进程,提供基于色谱分析的全方位加速服务,以支持、优化和搭建您的应用方法,缩短实验用时,节省实验室成本和各项运行效率。
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