用户之声 | 探访中国农业大学-植物应答盐碱胁迫的分子机制

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中国农业大学

姓名：杨永青 副教授

在用仪器：Monolith分子互作检测仪

用户背景介绍

杨永青副教授从2001-2006年在北京林业大学读博士。2006-2010年在北京生命科学研究所做博士后，2010年进入中国农业大学工作。主持和参与国家自然科学基金重点项目，面上项目，国际合作项目，国家科技部973项目和农业部转基因专项等。获得授权专利4项。在Mol Plant，Nat Commun，Plant Cell，New Phytol和JIPB等高水平学术期刊上发表SCI论文30余篇。

请介绍一下您的研究内容

我们长期从事植物应答盐碱胁迫的分子机制。盐碱胁迫会引起离子胁迫和渗透胁迫。离子胁迫是影响植物产量的主要因素。植物通过SOS途径将细胞内盐离子外排出去，SOS蛋白的转运依赖于质子ATPase建立的质子梯度，但具体如何调控机制不清楚。因此，我们主要研究的方向是植物应答盐碱胁迫下离子平衡调控的具体机制，并取得了突破性进展。

我从2013年左右了解到Monolith，大概统计了一下，近几年发表的文章中，至少有7篇用到了MST技术进行互作研究。在进行抗盐碱机制研究中，会涉及到质子泵，离子运输和信号传递等，进行的互作检测的分子类型也很丰富，包括蛋白质与蛋白质，蛋白质和有机小分子，蛋白与无机离子等，这些互作都可以在Monolith上完成快速检测。

请问Monolith分子互作检测仪如何满足您的研究需求？

在盐碱胁迫的机制研究中，会涉及到很多类型的分子，如蛋白和蛋白，蛋白和小分子，甚至是蛋白和无机离子的互作，都可以使用MST技术完成检测，而且MST的样品用量少，可以大大减少实验时蛋白提取的工作量。

比如说在进行Ca²⁺蛋白传感器SCaBP3蛋白参与碱胁迫响应的分子机制文章投稿时，The plant cell的reviewer提出需要证明SCaBP3与质膜H⁺-ATPase AHA2的互作，并且推荐ITC的方法。我们在进行ITC检测尝试时发现，该方法需要大量的蛋白，但每次蛋白的提取量为1-2mg，只可以做1-2次ITC实验，且无法进行重复。而MST方法检测的蛋白用量少，进行一次MST实验，仅需要18ng AHA2和200μg SCaBP3，节约大量样本和时间成本，因此我们采用了MST完成了该组互作实验，并顺利发表文章。

使用MST检测SCaBP3和AHA2 C的互作

https://doi.org/10.1105/tpc.18.00568

您认为Monolith分子互作检测仪有哪些优点？

分子互作检测方法对蛋白用量非常少，比如在进行蛋白SCAB和磷脂分子PI3P的K_d检测2时，MST实验仅需要10nM, 160μL的SCAB-蛋白，也就是130ng。

这组研究同时进行了PLO（Protein-lipid overlay assay）实验，但该实验流程较为复杂：需要1小时进行干膜,1小时进行SCAB蛋白孵育, 然后通过进行2小时的免疫印迹的方法检测，操作熟练的情况也需要4小时。但每次MST检测也只要15min，这项研究中涉及到两组，也就是检测只需要30min即可完成。因此，MST这种方法极大的提高了实验效率。

MST检测SCAB1与磷脂分子PI3P的亲和力

https://doi.org/10.1093/plcell/koab264

您对NanoTemper售后服务的印象？

NanoTemper技术团队一直能与我们进行快速地交流，及时解答问题。每年都会有线上和线下不同专题的培训活动，能够让实验室一届届学生快速掌握MST的实验流程，迅速开展相关实验，我们十分满意。

参与方式

1. 欢迎大家在文末留言，说说MST技术帮助您解决了什么问题或者您的心得体会等~

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*截止时间：2023.2.10

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