液相色谱分析流动相中酸的选择

磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸（常见的还比如甲酸，三氟乙酸等），他们的主要区别和选择在于：

实例：甘草酸铵含量测定液相色谱分析，结构式：

分析：此条件下基本分离，但杂质靠近主峰。

2）改变流动相比例为甲醇：醋酸：水=75：0.3：25，柱温30，流速1mL/min，Ultimate^® LP-C18（4.6*250mm，5μm)，效果图：

分析:  主峰包含杂质峰，分离度降低。

3）保持原流动相比例，改变柱温为25度，效果图：

分析：此条件下分离度>1.5，杂质距离主峰较远。

4）使用同款色谱柱重现，效果图：

分析：柱间分离情况及保留时间有差异。

分析：此条件下分离度仍不够。

2）改变流动相比例为甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28，柱温40，流速1mL/min，Topsil^® C18（4.6*250mm，5μm），效果图：

3）改变柱温为30，流动相比例为甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28，流速1mL/min，Topsil^® C18（4.6*250mm，5μm），效果图：

分析：分离度>1.5，达到要求。

4）多针重现，效果图：

分析：保留时间较小差异，分离度良好。

结论：使用36.5%醋酸的流动相体系时，在合格的色谱柱条件下，选择4支重现，保留时间差异大。可从以下角度分析：

1）该物质本身就是一个两性离子，有弱酸和弱碱离子，在此条件下，流动相本身的缓冲作用很有限。

2）流动相的pH在4-5之间，这时候在反相C18中硅羟基的解离状态是最活跃的时候（硅羟基的pKa在4.2至4.5之间），物质对填料状态以及柱子之间的差异很敏感，体现在用不同支的色谱柱差异大。在检测甘草及其制品中的该物质时，均出现过这样的现象。

3）醋酸属挥发性酸，在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸时，等量的变化在两种流动相体系中的影响程度不同，引起色谱结果差异性不同。

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