No.232 | 硫酸奈替米星的分析(中国药典&印度药典)

2022-11-28 17:01:38, YoYo老师 三耀精细化工品销售(北京)有限公司


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硫酸奈替米星为半合成的氨基糖苷类抗生素,抗菌谱与庆大霉素相似。其特点是对氨基糖苷乙酰转移酶稳定,对产生该酶而使其它氨基糖苷类抗生素耐药的菌株特别敏感。

中国药典


对硫酸奈替米星供试品粉末,使用同属为通用型气溶胶型检测器的NQAD检测器替代ELSD检测器,参考2020版《中国药典》硫酸奈替米星项下方法进行分析。

硫酸奈替米星

CAS: 71125-38-7

1.精密度

使用耐酸较强CAPCELL PAK C18 ACR S5色谱柱,参考药典条件,使用浓度为60 µg/mL的硫酸奈替米星供试品连续进样6针,以峰面积计算RSD为3.45%。


2.线性

对硫酸奈替米星供试品线性进行了简单考察。由于NQAD检测器呈线性响应,无需进行类似ELSD分析中的对数计算。结果中,硫酸奈替米星在10-100 µg/mL浓度范围,线性系数R2为0.9959,图1为线性方程图。

图1 硫酸奈替米星对照品线性方程

【色谱条件】

色谱柱:CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相:0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速:0.5 mL/min

柱  温:35 °C

检  测:NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品:10、20、40、60、80、100 µg/mL,溶剂为水

进样量:20 μL


3.定量限

将线性样品使用水稀释至6 µg/mL,并进样分析,结果见图2,S/N值为12.82,计算得到定量限约为4.68 µg/mL。

图2 硫酸奈替米星定量限分析结果谱图

【色谱条件】

色谱柱:CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相:0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速:0.5 mL/min

柱  温:35 °C

检  测:NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品:6 µg/mL,溶剂为水

进样量:20 μL


4.供试品

对硫酸奈替米星供试品进行分析,分析结果如图3所示。结果中,硫酸奈替米星理论塔板数为44214,不对称因子为1.39。

图3 硫酸奈替米星供试品分析结果谱图

【色谱条件】

色谱柱:CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相:0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速:0.5 mL/min

柱  温:35 °C

检  测:NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品:200 µg/mL,溶剂为水

进样量:20 μL

综上,使用CAPCELL PAK C18 ACR S5色谱柱,参考2020版《中国药典》硫酸奈替米星项下方法,在NQAD检测器下对硫酸奈替米星能够进行良好检测



印度药典


用户提供硫酸奈替米星供试品与硫酸西索米星供试品粉末,希望筛选色谱柱以满足印度药典IP2018硫酸奈替米星有关物质项下的要求。

具体要求如下:

1、供试品:称取50mg硫酸奈替米星,使用流动相溶解稀释并定容至50mL;

2、对照品a:量取1.0mL供试品,使用100mL流动相进行稀释即得;

3、对照品b:为混合对照品,由各含有流动相稀释而成的0.1%w/v的硫酸奈替米星供试品以及硫酸西索米星供试品组成;

4、分别进样对照品a与对照品b,对照品a的结果中主峰理论塔板数应不小于3000,拖尾因子应小于2.0,对照品b的结果中,硫酸奈替米星峰与硫酸西索米星峰的分离度应不小于1.0。


使用CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱,按照印度药典原条件进行分析。考虑到使用了离子对试剂作为流动相,所需的平衡时间较长,先将CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱用流动相进行低流速平衡过夜,完成平衡后进样对照品b,结果如图4所示。

图4 硫酸奈替米星分析结果谱图

图中峰上标为分离度

【色谱条件】

色谱柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相:2.02%庚烷磺酸钠w/v-0.5%v/v磷酸(称取庚烷磺酸钠一水合物11.0019g,加入500mL的0.5%磷酸溶液溶解即得) / 乙腈 = 62 / 38

流  速:1.0 mL/min

柱  温:25 °C

检  测:PDA 205 nm

供试品:含硫酸奈替米星供试品1.0mg/mL,溶剂为流动相

对照品b:含硫酸奈替米星供试品与硫酸西索米星供试品各1.0mg/mL,溶剂为流动相

进样量:20 μL


继续使用CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱,进样对照品a,结果如图5所示。硫酸奈替米星主峰理论塔板数为9961,不对称因子为1.35,符合印度药典IP2018主峰理论塔板数应不小于3000,拖尾因子应小于2.0的要求。

图5 硫酸奈替米星对照品a分析结果谱图

图中峰上标从上到下分别为不对称因子与理论塔板数

【色谱条件】

色谱柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相:2.02%庚烷磺酸钠w/v-0.5%v/v磷酸(称取庚烷磺酸钠一水合物11.0019g,加入500mL的0.5%磷酸溶液溶解即得) / 乙腈 = 62 / 38

流  速:1.0 mL/min

柱  温:25 °C

检  测:PDA 205 nm

对照品a:含硫酸奈替米星供试品10μg/mL,溶剂为流动相

进样量:20 μL


综上,在进行充分平衡后,使用CAPCELL PAK C18 MGII S5 色谱柱按照印度药典IP2018硫酸奈替米星有关物质项下原条件分析对照品b,硫酸奈替米星峰与硫酸西索米星峰分离度为2.02,可达到基线分离,按同样条件分析硫酸奈替米星对照品a,硫酸奈替米星主峰理论塔板数为9961,不对称因子为1.35,均符合要求



硫酸奈替米星 

中国药典 推荐用柱

F91104 CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

印度药典 推荐用柱

F92533 CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250


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