No.232 | 硫酸奈替米星的分析（中国药典&印度药典）

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硫酸奈替米星为半合成的氨基糖苷类抗生素，抗菌谱与庆大霉素相似。其特点是对氨基糖苷乙酰转移酶稳定，对产生该酶而使其它氨基糖苷类抗生素耐药的菌株特别敏感。

中国药典

对硫酸奈替米星供试品粉末，使用同属为通用型气溶胶型检测器的NQAD检测器替代ELSD检测器，参考2020版《中国药典》硫酸奈替米星项下方法进行分析。

硫酸奈替米星

CAS: 71125-38-7

1.精密度

使用耐酸较强的CAPCELL PAK C18 ACR S5色谱柱，参考药典条件，使用浓度为60 µg/mL的硫酸奈替米星供试品连续进样6针，以峰面积计算RSD为3.45%。

2.线性

对硫酸奈替米星供试品线性进行了简单考察。由于NQAD检测器呈线性响应，无需进行类似ELSD分析中的对数计算。结果中，硫酸奈替米星在10-100 µg/mL浓度范围，线性系数R2为0.9959，图1为线性方程图。

图1 硫酸奈替米星对照品线性方程

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相：0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速：0.5 mL/min

柱  温：35 °C

检  测：NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品：10、20、40、60、80、100 µg/mL，溶剂为水

进样量：20 μL

3.定量限

将线性样品使用水稀释至6 µg/mL，并进样分析，结果见图2，S/N值为12.82，计算得到定量限约为4.68 µg/mL。

图2 硫酸奈替米星定量限分析结果谱图

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相：0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速：0.5 mL/min

柱  温：35 °C

检  测：NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品：6 µg/mL，溶剂为水

进样量：20 μL

4.供试品

对硫酸奈替米星供试品进行分析，分析结果如图3所示。结果中，硫酸奈替米星理论塔板数为44214，不对称因子为1.39。

图3 硫酸奈替米星供试品分析结果谱图

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

流动相：0.2 mol/L三氟醋酸溶液 / 甲醇 = 84 / 16

流  速：0.5 mL/min

柱  温：35 °C

检  测：NQAD;气化温度,30℃;蒸发温度,35℃

样  品：200 µg/mL，溶剂为水

进样量：20 μL

综上，使用CAPCELL PAK C18 ACR S5色谱柱，参考2020版《中国药典》硫酸奈替米星项下方法，在NQAD检测器下对硫酸奈替米星能够进行良好检测。

印度药典

用户提供硫酸奈替米星供试品与硫酸西索米星供试品粉末，希望筛选色谱柱以满足印度药典IP2018硫酸奈替米星有关物质项下的要求。

具体要求如下：

1、供试品：称取50mg硫酸奈替米星，使用流动相溶解稀释并定容至50mL；

2、对照品a：量取1.0mL供试品，使用100mL流动相进行稀释即得；

3、对照品b：为混合对照品，由各含有流动相稀释而成的0.1%w/v的硫酸奈替米星供试品以及硫酸西索米星供试品组成；

4、分别进样对照品a与对照品b，对照品a的结果中主峰理论塔板数应不小于3000，拖尾因子应小于2.0，对照品b的结果中，硫酸奈替米星峰与硫酸西索米星峰的分离度应不小于1.0。

使用CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱，按照印度药典原条件进行分析。考虑到使用了离子对试剂作为流动相，所需的平衡时间较长，先将CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱用流动相进行低流速平衡过夜，完成平衡后进样对照品b，结果如图4所示。

图4 硫酸奈替米星分析结果谱图

图中峰上标为分离度

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相：2.02%庚烷磺酸钠w/v-0.5%v/v磷酸（称取庚烷磺酸钠一水合物11.0019g，加入500mL的0.5%磷酸溶液溶解即得） / 乙腈 = 62 / 38

流  速：1.0 mL/min

柱  温：25 °C

检  测：PDA 205 nm

供试品：含硫酸奈替米星供试品1.0mg/mL，溶剂为流动相

对照品b：含硫酸奈替米星供试品与硫酸西索米星供试品各1.0mg/mL，溶剂为流动相

进样量：20 μL

继续使用CAPCELL PAK C18 MGII S5色谱柱，进样对照品a，结果如图5所示。硫酸奈替米星主峰理论塔板数为9961，不对称因子为1.35，符合印度药典IP2018主峰理论塔板数应不小于3000，拖尾因子应小于2.0的要求。

图5 硫酸奈替米星对照品a分析结果谱图

图中峰上标从上到下分别为不对称因子与理论塔板数

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相：2.02%庚烷磺酸钠w/v-0.5%v/v磷酸（称取庚烷磺酸钠一水合物11.0019g，加入500mL的0.5%磷酸溶液溶解即得） / 乙腈 = 62 / 38

流  速：1.0 mL/min

柱  温：25 °C

检  测：PDA 205 nm

对照品a：含硫酸奈替米星供试品10μg/mL，溶剂为流动相

进样量：20 μL

综上，在进行充分平衡后，使用CAPCELL PAK C18 MGII S5 色谱柱按照印度药典IP2018硫酸奈替米星有关物质项下原条件分析对照品b，硫酸奈替米星峰与硫酸西索米星峰分离度为2.02，可达到基线分离，按同样条件分析硫酸奈替米星对照品a，硫酸奈替米星主峰理论塔板数为9961，不对称因子为1.35，均符合要求。

硫酸奈替米星 

中国药典 推荐用柱

F91104 CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6×250

印度药典 推荐用柱

F92533 CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

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