2020版药典四部增修《高效液相色谱法》等17份标准的征求意见稿！

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中国药典

将于2020年出台的第11版《中华人民共和国药典》预计将收载品种数6400个左右，增订品种800个，修订品种1400个。

2018年11月15日，国家药典委员会发布了“关于《中国药典》2020年版四部通则增修订内容（第二批）的公示”。公示中指出，在广泛征求意见及国家药典委员会组织的相关科研课题研究结果基础上，完成了四部相关通则的起草工作，并经第十一届药典委员会相关专业委员会审议，形成了征求意见稿（第二批），为进一步完善药典通则内容，将在国家药典委员会网站公开征求意见，公示期三个月。

理化分析通则增修订内容

0512 高效液相色谱

0601 相对密度测定法振荡型密度计法

2322 汞和砷元素形态及其价态测定法

比表面积测定

固体密度测定法

生物检定通则增修订内容

1145 降压物质检查

1146 组胺类物质检查

1208 肝素生物测定法

微生物通则增修订内容

1105 微生物计数

1121 抑菌效力检查法

9203 药品微生物实验室质量管理指导原则

制剂通则增修订内容

0100 制剂通

0102 注射

0103 胶囊

0104 颗粒

0106 鼻用制剂

现将高效液相色谱法部分通则修订内容汇总如下：

流动相 

反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般应不低于 5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。

正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。

流动相注入液相色谱仪的方式（又称洗脱方式）可分为两种：一种是等度洗脱，另一种是梯度洗脱；用梯度洗脱分离时，通常以表格的形式在品种项下规定，其中包括运行时间和流动相在不同时间的成分比例。

品种正文项下规定的条件，除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可调整。

若需使用小粒径（约 2μm）填充剂以提高分离度或缩短分析时间，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配，必要时，色谱条件（参数）可适当调整。

调整后，系统适用性应符合要求，且色谱峰出峰顺序不变。若减小进样体积，应保证检测限和峰面积的重复性；若增加进样体积，应使分离度和线性关系仍满足要求。

对于梯度洗脱，调整其色谱参数应比调整等度洗脱色谱参数时更加谨慎，因为此调整可能会使某些峰位置变化，造成峰识别错误，或者与其他峰合并。

色谱参数允许调整范围见表 1。 

表 1 色谱柱、填料粒径和相应参数允许调整的范围

F1：原方法中的流速

F2：调整后方法中的流速

dc1：原方法中色谱柱的内径

dc2：调整后方法中色谱柱的内径

dp1：原方法中色谱柱的粒径 

dp2：调整后方法中色谱柱的粒径 

Vinj1：原方法中进样体积

Vinj2：调整后方法中进样体积

L1：原方法中色谱柱柱长

L2：调整后方法中色谱柱柱长

tG1：原方法的梯度段洗脱时间

tG2：调整后的梯度段洗脱时间

可通过相关软件计算表 1 中流速、进样体积和梯度洗脱程序的调整范围，并根据色谱峰分离情况进行微调。

调整超出表 1 中规定的范围，调整的方法应进行相应的方法学验证。

无论调整后的方法验证与否，当对其测定结果产生异议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

在品种项下一般不宜指定或推荐色谱柱的品牌，但可规定色谱柱的填料（固定相）种类（如键合相，是否改性、封端等）、粒径、孔径，色谱柱的柱长或柱内径；当耐用性试验证明必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。

测定法

保留时间（retention time）tR被定义为被分离组分从进样到柱后出现该组分最大响应值时的时间，也即从进样到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，常以分（min）为时间单位，用于反映被分离的组分在性质上的差异。通常以在相同的色谱条件下待测成分的保留时间与对照品的保留时间是否一致作为待测成分定性的依据。

在相同的色谱条件下，待待测成分的保留时间与对照品的保留时间应无统计学意义上的显著性差异；两个保留时间不同的色谱峰归属于不同化合物，但两个保留时间一致的色谱峰有时未必可归属为同一化合物，在作未知物鉴别时应特别注意。

若改变流动相组成或更换色谱柱的种类，待测成分的保留时间仍与对照品的保留时间一致，可进一步证实待测成分与对照品为同一化合物。

当待测成分（保留时间tR,1）无对照品时，可以样品中的另一成分或在样品中加入另一成分作为参比物（保留时间tR,2），采用相对保留时间（RRT）作为定性（或定位）、校正因子计算含量的方法。在品种项下，除另有规定外，相对保留时间以未扣除死时间的非调整保留时间按下式计算。

若需以扣除死时间的调整保留时间计算，应在相应的品种项下予以注明。