体积排阻色谱知多少？

体积排阻色谱（ size-exclusion chromatography，SEC）是快速分离不同分子量混合物的色谱方法，可以快速的确定样品混合物的复杂性，而且可以同时给出各个组分的大概分子量及分布。

分离原理：分子的体积排阻，样品组分和固定相之间原则上不存在相互作用，色谱柱的固定相是具有不同孔径的多孔凝胶，只让临界直径小于凝胶孔开度的分子进入（保留），其孔径大于溶剂分子，所以溶剂分子可以自由地出入。高聚物分子在溶液中呈无规则线团，线团的体积和分子量有一定的线性关系，对不同大小的溶质分子可以渗透到不同大小的凝胶孔内不同的深度，小的溶质分子，大孔小孔都可以进去，甚至可以渗透到很深的孔中。因此小的溶质分子保留时间长，洗脱体积大，而大的溶质分子保留时间短，洗脱体积小。

分类

凝胶过滤色谱GFC

凝胶渗透色谱GPC

固定相

低交联度多孔聚合物

（在有机溶剂中会溶胀）

如葡聚糖，琼脂糖，

聚丙烯酰胺

交联聚苯乙烯树脂

（在有机溶剂中溶胀性较小）如聚乙烯-二苯乙烯共聚物

流动相

水

有机溶剂，THF，

DMF，三氯甲烷

应用对象

多肽生物大分子蛋白子，

纤维素衍生物，

聚乙烯醇多糖类

结晶合成聚合物，

小分子聚合物

优缺点

耐高温

使用广泛，渗透性好，

柱效高，不宜长期高温

条件使用

GPC色谱柱选择

按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列：

THF，DMF，三氯甲烷。

按照样品分子量范围来选择色谱柱：

样品分子量应处在排阻极限和渗透极限的范围内，并且最好是处在校正曲线线性范围内。

SEC中流动相仅起到在柱子中

运输溶质的作用

流动相选择：

能完全溶解样品，但不与试样反应，不与填料有任何相互作用，黏度低，沸点比柱温高20-50℃。

典型的流动相：

100mmol磷酸钾和氯化钾溶液。

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