猪肉中四环素类药物残留量的测定

一、适用范围

适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定（该实验选用基质为猪肉）。

参考标准：《GB/T 20764-2006 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》

二、提取步骤

称取试样6g（精确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入20mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液，涡旋混匀，8000r/min离心5min，吸取上清液于另一离心管中，残渣中加入20mL提取液，重复提取一遍，合并提取液，吸取10mL上清液，待净化。

三、净化

SPE小柱：Welchrom® BRP规格：500mg/6mL。

活化：5mL甲醇，10mL水，弃去；

上样：全部上样，弃去；

淋洗：5mL淋洗液，弃去；

洗脱：15mL乙酸乙酯；

洗脱液于40℃氮吹除去乙酸乙酯，用流动相加至5mL，待测。

四、色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，4.6×150mm,3μm；

流动相：乙腈-甲醇-0.01mol/L草酸溶液（2:1:7）

流速：0.5mL/min；

柱温：30℃；

进样量：60μL；波长：350nm。

五、色谱图或者加标回收率结果

图1.   四环素类混标0.1mg/L图谱

表1、出峰情况

峰名称

保留时间

峰面积

峰高相对

峰面积

拖尾因子

塔板数

_

min

mAU*min

mAU

%EP

(USP)

土霉素

5.775

0.270

2.408

37.08

0.98

18589

四环素

6.658

0.257

2.065

35.28

0.98

20538

金霉素

12.836

0.069

0.276

9.51

0.97

15239

强力霉素

18.703

0.132

0.346

18.13

0.98

14166

图2. 猪肉样品空白图谱

图3. 猪肉样加标0.3mg/kg图谱

表2、加标回收率表

名称

加标水平mg/kg

平均回收率%

RSD %

（n=2）

土霉素

0.3

104%

1.62%

四环素

0.3

102%

4.46%

金霉素

0.3

107%

0.70%

强力霉素

0.3

80%

3.38%

六、相关产品信息

货号名称规格

00522-20006

SPE小柱

Welchrom® BRP,500mg/6mL,30pk

00837-05006

50mL螺口尖底离心管

Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包

00837-05002

15mL螺口尖底离心管

Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包

00824-31001

固相萃取装置

Welch 固相萃取装置，12位方缸

00821-32291

盖子+垫片

Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk

00821-40927

样品瓶

Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk

00201-21041

液相色谱柱

UItimate® XB-C18，4.6×150mm,3μm

00826-O024P250

盐酸土霉素标准品

A2S, CAS No.:2058-46-0,250mg

00826-T156P250

四环素盐酸盐标准品

A2S, CAS No.:64-75-5,250mg

00826-C162P250

金霉素盐酸盐标准品

A2S, CAS No.:64-72-2,250mg

00826-D428P100

盐酸强力霉素(脱氧土霉素盐酸盐，盐酸多西环）标准品

A2S, CAS No.:24390-14-5,100mg

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