解锁天然产物分析“利器”（一） | 二维液相色谱破局中药提取物四维分离

图1. 四维分离策略用于人参(WG)和红参(RG)中人参皂苷的深度表征示意图。 

图2. 离线2D-LC系统中固定相的筛选。A. 图为第二维色谱柱的基峰离子流图；B. 图为第一维备选色谱柱与第二维HSS T3柱正交性初步评价散点图。从人参皂苷整体分离的角度考虑，HSS T3色谱柱可以实现平衡的分配效果，并具有较好的峰对称性。通过计算21种人参皂苷在两根色谱柱上的相对保留时间(0-1)的线性回归相关系数(R²)，根据与HSS T3的选择性差异来选择第一维的固定相。在此阶段，筛选了6种不同机制的色谱柱。结果表明，HILIC柱与RP HSS T3柱的组合对人参皂苷分离的正交性更高。通过配置Acchrom XAmide色谱柱(¹D)和HSS T3色谱柱(²D)开发的离线2D-LC系统，根据Camenzuli和Schoenmakers [1]报道的方程法计算76种人参皂苷的分布，评价所开发2D-LC系统的正交性。每个维度的峰容量分别为66和138。可以推算出HILIC × RP体系的有效峰容量为976，大大了提高人参和红参多组分的分离性能。

图3. MS^E与HDMS^E对于人参皂苷分析的性能比较。包括基峰离子流图(A和B)、三个成分的全扫描质谱图(C-E)和二维漂移图(F)。三个成分的全扫描质谱图中，HDMS^E模式采集的数据要比MS^E干扰少，但两种模式下响应并没有明显差别。此外，由于IM分离的加入，共洗脱离子得到了进一步分离，3个成分的漂移时间(t₃ < t₁ < t₂)与m/z相关。图3F标注了三种化合物的不同加合形式。