2022-08-20 16:25:53, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
ADC药物是现下最热们的大分子生物药赛道,我们一起来看看ADC药物分析中会使用到何种仪器吧。
首先,ADC 单抗药物表征
分子量、氨基酸序列、糖基化位点以及ADC 药物结合位点鉴定,我们推荐THERMO 高分辨质谱来做分析,Q-Exactive 串联质谱仪结合了高选择性的四级杆质谱检测器和高分辨、高灵敏度的 OrbitrapTM 质量分析器,大大提高了离子的选择性、灵敏度和质量精度。该系统具有 140,000 的分辨率(FWHM)、更高的灵敏度、更快的扫描速度和更大的动态范围,同时结合了 HCD 碎裂技术,可以实现串级质谱碎裂和鉴定,为深度复杂样品分析,包括蛋白质组学、代谢组学、脂类组学等样品的鉴定,翻译后修饰和定量分析,提供了全面、高效和快速的质谱分析平台。
ADC相关成分的定量分析
一般需要采用基于分离的技术表征ADC的单体含量、游离和能力,例如:尺寸排阻色谱法(SEC)、反相色谱法(RPC)、疏水相互作用色谱(Hydrophobic interactionchromatography, HIC)等。此外,质谱( Mass Spectroscopy , MS )可用于识别细微的分子结构变化; SEC可用于对挥发性流动相中的ADC进行脱盐;在稳定性期间还可采用SEC检测ADC片段.
运用电喷雾电离质谱(ESI-MS)技术可识别基于半胱氨酸偶联技术的ADC的分布,其在于可准确地观察分子离子或准分子子;通过液质联用(LCMS)与RPC相结合的方法可确认偶联类型和DAR。通常, LCMS技术用于Fc结构域中含有保守N-低聚糖的还原或非还原性ADC的分析,以减少异质性。
RPC和HIC为基于分子疏水性的分离方法中, RPC用于确定负荷、分布和异质性,量化分析ADC混合物中的游离、ADC在不同储存条件下的稳定性以及表征通过重链或轻链附着到Linker.上的mAb。与RPC类似, HIC是另一种用于表征ADC疏水性的分析技术,DAR较的ADC表现出疏水性,可通过HIC进行表征。
此外,亲水性相互作用色谱是-种比反相液相色谱的亚单位水平结合物表征技术,运用LC-MS与HILIC相结合的方法可表征ADC的Payload和聚糖修饰;肽图分析法(Peptide mapping)是研究特定ADC荷分布的另一种工具,多用于研究蛋白质分子的一级结构和确定蛋白质分子内表面暴露的表位.
法通于去除Fc结构域中的保守N-低聚糖;生物分析测定法用于评估释放的游离、抗体总量和DAR; ELISA是定量与mAbs相偶联的Payload的方法; MS用于测定游离的浓度;基于特定配体的分析方法用于了解ADC的特异性结构,可作为早期筛选技术;电化学发光技术已用于表征完整ADC分子的结合能力。
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