液相分析常见问题③ 保留时间不稳怎么办?

2022-08-11 18:01:09, YoYo老师 三耀精细化工品销售(北京)有限公司




为啥保留时间总是挪来挪去?

为啥保留时间总是跳来跳去?

YoYo又来答疑解惑啦~

开熏不开熏 ღ( ´・ᴗ・` )比心



保留时间不稳定主要是由于液相系统 or 液相方法两方面所导致~


下面就让YoYo来给大家说道说道~


仪器系统问题

- 排 查 方 法 -


检查是否存在管线漏液

→ 检查仪器所有管线接口处,特别是色谱柱两端螺丝是否完全拧紧


检查是否泵中混入气泡

→ 检查压力波动,将流动相重新脱气并进行purge操作


检查是否泵供液不准

→ 分享一个判断泵供液准确性的小窍门:

将系统流速设为1 mL/min,手机or秒表计时1 min,确认1 min时间段出口流出液体体积是否为1 mL,即可判断泵是否准确供液~


液相方法问题

- 排 查 方 法 -


色谱柱及流动相温度

→ 建议使用柱温箱,保证柱温稳定

→ 保证室温恒定,即流动相温度恒定

 

充分平衡

→ 使用离子交换色谱柱或使用离子对试剂时,平衡时间不足将导致保留时间漂移,建议使用离子交换模式进行分析时,对色谱柱进行过夜充分平衡

 

流动相pH值

→ 离子型化合物可能由于流动相pH设定不合理而发生漂移,建议将流动相的pH值设定在化合物的pKa±2以上范围



洗脱方法

→ 复杂样品建议使用梯度条件分析,杂质的不完全洗脱可能导致主峰出峰时间变化


离子交换模式下平衡对保留时间的影响


使用离子交换色谱柱分析时,由于平衡不够导致的出峰时间漂移。


解决方案:

加长平衡时间,可使用流动相小流速平衡过夜


事例:

使用强阳离子交换色谱柱——CAPCELL PAK SCX对三聚氰胺进行分析,随着平衡时间的延长,最终在平衡20h以上时达到保留时间的稳定。

三聚氰胺



HPLC Conditions:

Column: CAPCELL PAK SCX UG80 S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

M.Phase: 50 mM KH2PO4 ( pH 3.0 adjusted with H3PO4) / CH3CN = 70 / 30

Flow rate: 1 mL/min

Oven Temp.: 30°C

Detector: UV 240 nm

Sample: Melamine in M.P.

Inj. Vol.: 20 μL


遇到保留时间不稳的问题时,从以上几个方面进行排查,相信一定可以解决您的问题~



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