世界肝炎日｜聚焦“检不出病毒”的CHB人群——超高敏HBV自动化核酸检测方案，让病毒“无处可逃”！

2022-07-30 07:18:28 西安天隆科技有限公司

7月28日是世界肝炎日，今年我国疾控中心宣传主题是：防治肝炎，健康你我。号召公众积极主动接种肝炎疫苗，主动进行体检了解肝脏健康状况，慢性病毒性肝炎患者接受规范的抗病毒治疗，全面遏制病毒性肝炎对人类健康的威胁。

病毒性肝炎是全球公共卫生问题，尤其是乙型肝炎，严重危害人类健康。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）的长期持续感染可能会发展为慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）、肝硬化，甚至肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。尽管近年来我国的乙肝预防和控制工作取得很大成效，但患者人群基数依然庞大，防治形势依然严峻。据报道，目前中国约1800万的慢性乙肝感染者中，获得诊断的不足25%，治疗覆盖率只有约10%^[1]。

随着人们对HBV的感染机制和新的治疗药物靶点的不断探索，更多新型抗病毒药物和免疫干预措施被研发出来。当前针对CHB的抗病毒治疗主要有干扰素-α（IFN-α）和核苷（酸）类似物（nucleos(t)ide analogues，NAs）为代表的两类药物，后者包括拉米夫定、恩替卡韦、恩曲他滨、替比夫定、克拉夫定、阿德福韦酯、替诺福韦等。这些药物可有效抑制HBV复制，使患者血清HBV DNA低于检测下限，为广大乙肝患者的预后带来了极大的获益。

新近在JAMA Oncology杂志上发表的韩国大样本队列研究显示，选择恩替卡韦治疗的患者中由于多数曾经应用过拉米夫定治疗，HBV DNA未检出率低于替诺福韦治疗组，相应的ALT复常率也低于替诺福韦治疗组。因此，恩替卡韦治疗组无论在疾病进展还是HCC发生上均高于替诺福韦治疗组。与此同时，也可以看到NAs治疗必须将血清中HBV DNA降得越低越好^[2]。

治疗策略和治疗药物的不断发展，对在乙肝诊断和治疗监测的过程中发挥关键作用的HBV检测技术提出了更高的要求。以往常规免疫学方法虽可反映患者HBV感染的免疫状态，但易漏检隐匿性感染或感染初期未产生特异性抗体的窗口期感染者。经过长期抗病毒治疗后，部分患者体内的HBV病毒依然在长期低水平复制，血清HBV DNA仍然能检测到，容易导致疾病继续进展，甚至发生HCC。

随着分子生物学的发展，HBV DNA检测技术也已进展到高灵敏水平，能准确反映患者体内HBV的复制情况和传染性，帮助临床准确判断乙肝的治疗起点及停药时机；此外，还可帮助临床更早发现低病毒血症（low level viremia，LLV）和隐匿性乙肝（occult hepatitis B virus infection，OBI）等人群，尤其是通过此前普通核酸检测技术“检不出病毒”的CHB人群。高灵敏的HBV DNA定量检测对指导临床治疗也有着重要的作用，根据病毒载量的高低，可及时调整治疗方案从而选用更高疗效的药物。

据武汉市金银潭医院的一项研究发现，对恩替卡韦经治后低病毒血症的慢性乙型肝炎患者，更换富马酸丙酚替诺福韦抗病毒治疗能够有效提高低病毒血症患者的HBV DNA（<10 IU/mL）及HBeAg阴转率，并明显改善患者肝肾功能、减轻肝纤维化程度，治疗安全性好^[3]。这也证明了高灵敏HBV DNA检测技术对抗病毒治疗中药物疗效的评估具有重要意义。高灵敏HBV DNA检测的临床价值也在国际及国内多项临床研究中均得以佐证^[4-7]^。

国际上多项慢性乙肝防治指南中均推荐使用高灵敏HBV DNA定量检测，其中欧洲肝脏研究学会、美国肝病研究学会等发表的最新指南中也分别提出了<10 IU/mL、5-10 IU/mL的最低检测限，可看到各大指南都对HBV DNA检测灵敏度提出了更高要求，如下图：

目前，国内外HBV DNA定量高灵敏检测技术已经较为成熟，各厂家技术指标的差别主要集中在内标、灵敏度、线性范围以及覆盖基因型等参数。市场上主流的HBV DNA定量试剂的灵敏度可达到10 -15 IU/mL，定量下限在20 IU/mL左右，如下图所示：

部分高灵敏度HBV DNA 试剂

天隆科技依托国家科技重大专项“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”开发的超高敏HBV DNA检测试剂性能优异，检测下限低至5IU/mL，尤其适合低病毒载量患者。定量范围宽至15 -1.0×10⁹ IU/mL，能有效指导乙肝精准诊疗。采用全新的一管法设计，直接分装加样后即可上机实验，操作简便。试剂含UNG酶+dUTP防污染体系设计，最大化防止产物污染带来的假阳性结果。

核酸提取效率是影响检测准确性的重要因素，对于低载量乙肝病毒的精准检测尤为重要。据此，天隆科技可提供超高敏HBV核酸检测整体解决方案，涵盖自主研发的自动化核酸提取、荧光定量PCR检测系列仪器及配套提取、检测试剂。天隆全自动核酸工作站和PCR扩增平台，自动化、高效率、抗污染，保障实验结果的精准。此外值得一提的是，天隆科技牵头制定了国家医药行业标准《（YY/T1717-2020）核酸提取试剂盒（磁珠法）》，在此标准下产业化的核酸提取试剂，提取更加简便、高效。在自动化设备和标准化试剂的双重加持下，大幅提高了检测灵敏度、准确度和重复性，为临床诊疗提供更为精准的检测结果，从而助力改善HBV感染者临床结局。

作为贯穿整个乙型肝炎诊疗过程的重要指标，高灵敏HBV DNA定量检测是实现慢性乙肝精准治疗、追求临床治愈的一大前提。相信随着乙肝治疗水平发展、新型靶向性药物推出，以及诊断技术的不断提升，慢性乙肝临床治愈的可能性也会得到很大提升，而这些终将助力全球2030年消除病毒性肝炎的总体目标早日实现。

天隆「医」直播邀请了数位国内肝病领域知名的临床与检验专家，针对HBV超高敏检测优化乙肝防治策略、乙肝的精准诊疗等内容开展了精彩的学术专题报告，以下将专家所提出的重要观点作以凝练，并附往期HBV医直播精彩回放与大家分享。

专家观点

长期抗病毒治疗时，定期进行HBV DNA检测尤为重要，尤其是高灵敏的检测。

高灵敏核酸定量检测对乙肝的精准诊疗至关重要，也可在早期辅助判断抗病毒药物耐药的风险。建议抗病毒治疗患者每3-6个月进行一次高敏检测HBV DNA，评估疗效。

追求临床治愈必须全程监测病毒指标，高灵敏的试剂为追求临床治愈所必须。

临床治疗中采用高灵敏度HBV DNA定量检测技术，可及早发现其病毒学突破，有助于临床判断病毒是否达到了最低控制水平，及时调整治疗策略。

2019年《中国慢性乙型肝炎防治指南》强调：更积极进行抗乙肝治疗，甚至有主张“HBV DNA阳性即治疗”。因此，HBV DNA检测的灵敏度变得更为重要。

LLV诊断准确性不足、可靠性不高，可能由于HBV DNA检测平台的手工操作所致。未来核酸检测平台试剂+设备将由“开放”走向“封闭”，从核酸提取到PCR结果判读全流程的自动化、无人工干预是核酸定量检测的发展趋势。

参考文献

1. 世界卫生组织/健康主题/肝炎.https://www.who.int/china/zh/health-topics/hepatitis

2. Choi J, Kim HJ, Lee J, et al. Risk of hepatocellular carcinoma in patients treated with entecavir vs tenofovir for chronic hepatitis B: a Korean nationwide cohort study[ J]. JAMA Oncol, 2019, 5: 30-36.

3. 程海林，等．富马酸丙酚替诺福韦对恩替卡韦经治后低病毒载量的慢性乙型肝炎患者的临床疗效.临床肝胆病杂志2022年3月第38卷第3期.

4. Jonggi Choi ,Chanyoung Jo, and Young-Suk Lim. Tenofovir Versus Entecavir on Recurrence of Hepatitis B Virus–Related Hepatocellular Carcinoma After Surgical Resection. Hepatology, VOL. 73, NO. 2, 2021.

5. 中华医学会肝病学分会. 扩大慢性乙型肝炎抗病毒治疗的专家意见. 中华肝脏病杂志2022年2月第30卷第2期.

6. Pan CQ, Afdhal NH, Ankoma-Sey V, et al. First-line therapies for hepatitis B in the United States: A 3-year prospective and multicenter real-world study after approval of tenofovir alefenamide. Hepatol Commun. 2022 Apr 21.

7. Hyung Joon Yim，Sang Jun Suh，Young Kul Jung，et al.Tenofovir-based combination therapy or monotherapy for multidrug-resistant chronic hepatitis B: Long-term data from a multicenter cohort study. J Viral Hepat. 2020 Aug 20.