【应用分享】水产品中大环内酯的提取与检测

2022-06-16 15:40:59

背景

大环内酯类抗生素（Macrolide antibiotics，MALs）是一类具有12-16个碳内酯环的抗生素类群，是一类应用广泛的兽药。滥用或者不当使用该兽药时，可能会导致动物性食物中抗生素的残留，通过食物链，进入人体内，在体内积累到一定浓度时，会对人体的前庭和耳蜗神经造成损害，严重者会对肝肾造成损害。为保障食品安全，我国农业部235公告对食用性组织中大环内酯的最大残留量做出了规定，同时国家标准GB 31660.1-2019中也规定了水产品中大环内酯的测定方法。因被测样品基质较为复杂、可能会存在基质效应的干扰，样品必须经过固相萃取柱的净化方可进行后续测定。

适用范围

参照《GB 31660.1-2019 食品安全国家标准水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，本方法适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量的检测。

实

验

步

骤

1、样品制备

参照GB 31660.1-2019样品提取方法，称取样品5 g（准确至±20 mg）于50 mL塑料离心管，加入乙腈20 mL，于旋涡混合器上以2000 r/min旋涡1 min，超声5 min，以3500 r/min离心6 min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙腈15 mL，重复提取一次，合并上清液，备用。

2、净化

SPE柱：SelectCore Alumina N 2000 mg/6 mL固相萃取柱；
活化：加入5.0 mL乙腈活化，保持柱体湿润；
上样：加入步骤1中制备好的全部上清液，并收集上样液；
洗脱：用5.0 mL乙腈洗脱，收集全部洗脱液；
洗脱液于40 °C旋转蒸发至干。用2 mL乙腈溶解残余物，涡旋混匀，过0.22 µm尼龙滤膜，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。

3、液相色谱仪器条件

Column: ChromCore C18 1.8 μm

Dimension: 2.1×50 mm

Mobile Phase: A) 0.1% HCOOH

B) ACN

Gradient:

t (min)	A	B
0	90	10
3.00	60	40
6.00	20	80
6.50	0	100
7.50	0	100
7.60	90	10
11.00	90	10

Flow Rate: 0.4 mL/min

Temperature: 30 °C

Injection: 2 μL

4、质谱仪器条件

ESI in positive ionization mode

Ion Spray voltage: 4000 V

Source Temperature: 300 ℃

Nebulizer Gas: 45 psi

5、实验谱图及加标回收率数据

实验谱图

图1：20 ng/mL 9种大环内酯类药物标准溶液的多重反应监测（MRM）色谱图

图2：鱼肉空白样品里的9种大环内酯类药物的多重反应监测（MRM）色谱图

图3：鱼肉样品中添加量为8 μg/kg的9种大环内酯类药物的多重反应监测（MRM）色谱图

图4：鱼肉样品中添加量为16 μg/kg的9种大环内酯类药物的多重反应监测（MRM）色谱图

加标回收率数据

保留时间（min）	化合物（中文）	化合物（英文）	加标量（μg/kg）	平均回收率%
4.240	替米考星	Tilmicosin	8	108.5%
			16	103.1%
4.463	竹桃霉素	Oleandomycin	8	107.5%
			16	99.5%
4.687	红霉素	Erythromycin	8	94.0%
			16	91.3%
4.933	泰乐菌素	Tylosin	8	101.1%
			16	92.5%
5.168	吉他霉素	Kitasamycin	8	94.6%
			16	86.3%
5.285	克拉霉素	Clarithromycin	8	92.4%
			16	90.5%
5.284	阿奇霉素	Azithromycin	8	90.7%
			16	90.2%
5.589	交沙霉素	Josamycin	8	92.5%
			16	88.3%
5.853	螺旋霉素	Spiramycin	8	90.3%
			16	88.6%