2022-05-31 09:13:39 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
体积排阻色谱法(SEC)是对蛋白质等大分子进行分析的经典方法。而在众多的蛋白质中,FC融合蛋白在复杂的糖基化修饰的影响下,蛋白质结构和折叠也更加复杂,为SEC分析提出了更多挑战。对于FC融合蛋白的分析,研究人员往往需要谨慎地对SEC方法进行优化。而Biozen dSEC系列产品,基于其优秀的耐用性、稳定性,为FC融合蛋白的SEC分析提供了新思路。
图为:FC融合蛋白依那西普(Etanercept)结构图
依那西普(Etanercept)是一种高度糖基化的FC-TNFR融合蛋白,由于其经常会因唾液酸化,会与色谱柱填料间产生非体积排阻型的离子排斥作用力,干扰正常的SEC模式分离,并进一步造成峰展宽变大,影响蛋白质定量的准确性。为减少非体积排阻型作用力的干扰,应保证流动相内含有充足的共溶剂(如氯化钠或其他盐类)。以下实验中,采用高浓度的磷酸盐缓冲液降低离子排斥作用力。
LC色谱条件
色谱柱:Biozen® 3 μm dSEC-2, 200 Å
规格:300 x 7.8 mm
货号:00H-4788-K0
流动相:50mM Sodium Phosphate + 300 mM NaCl, pH 6.8
流速:1.15 mL/min
进样量:10 μL
温度:30 ℃
检测器:UV @ 280nm
样品:As indicated
采用高浓度的磷酸盐缓冲液
对依那西普(Etanercept)进行SEC分析的谱图
这一思路可以广泛应用于各类FC融合蛋白。阿柏西普是FC-VEGF融合蛋白,分析难度也高于普通的单克隆抗体。下图显示,采用Biozen dSEC色谱柱,实现了出色的分离,单体及聚集体峰的峰形良好。非常有助于精确的定量分析。
除了FC融合蛋白以外,Biozen dSEC可以应用于更多蛋白质及大分子的分析,是研究人员必备的分析利器。想要了解更多Biozen dSEC的应用和优秀分离表现,请关注5月31日上午十点,Phenomenex高级技术专家Kevin(招晖)老师的网络讲座,在讲座中我们将与大家进行探讨并分享体积排阻色谱SEC方法的可靠性和可转移性。
网络讲座
讲座时间:
5月31日 10:00-12:00
讲座主题:
体积排阻色谱法(SEC)的可靠性和可转移性
讲座概要:
体积排阻(SEC)色谱方法简介
仪器系统和色谱柱在方法转移时的注意事项
对传统方法进行升级时的注意事项
色谱方法的稳健性
SEC方法的批次间、色谱柱间的重现性问题
主讲人:
招晖 Phenomenex高级技术专家
讲师介绍:
Kevin在加利福尼亚州州立理工大学波莫纳分校获得生物医学学士学位,在德克萨斯州圣道大学获得工商管理硕士学位,在加利福尼亚州州立大学洛杉矶分校获得化学和生物化学硕士学位。现主要负责亚太区域尤其在中国市场的技术支持和业务发展。
报名方式:
07-01 英斯特朗
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