2022-04-18 23:21:44, ACD/Labs 李丹 Advanced Chemistry Development, Inc. (ACD/Labs)
高效液相色谱法是我们日常检测使用最广泛的一种方法,而色谱柱是每个色谱系统的“心脏”,并且色谱柱的发展是所有色谱元素中变化最大的。色谱柱供应商也致力于研发新的色谱柱固定相及载体,这导致市场上有大量的色谱柱可供选择。由于固定相生产的差异,目前市场上几乎没有一种反相高效液相色谱柱是相同的。固定相之间的多样性对分析人员有利,在分析不同的目标对象时可对应的选择相应的色谱柱。另一方面,这也迫使分析实验室维护大量不同的色谱柱。
因此,选择合适的色谱柱是开发特定反相高效液相色谱方法的关键环节,特别是考虑到日益增加的样品复杂性。通常研究员会基于自己的经验知识(和/或化学直觉)的试错法进行色谱柱选择。然而,这种方法是劳动密集型的,可能会导致矛盾的结果。因此,在选择色谱柱时需要一个基于客观(数值)标准的良好的色谱柱分类系统,采用相同的评判标准对色谱柱的不同性能进行考察。
本文提供三种免费的色谱柱信息查询方法,每种方法所采用的评价体系不尽相同,本文着重介绍ACD/Labs软件中色谱柱评价体系。
ACD/Labs官网
https://www.acdlabs.com
USP网站
https://apps.usp.org/app/USPNF/columnsDB.html
HPLC Columns网
http://www.hplccolumns.org/database/index.php
根基施耐德疏水减法保留公式,ACD/Labs采用的是Eurbey的Tanaka柱效评价体系,通过4个实验分别考察了色谱柱的疏水性,疏水基团含量,空间位阻选择性,硅羟基残留量,离子交换能力(酸性和中性条件),详细信息见表1。被考察的每根色谱柱在这六个方面的能力以雷达图的形式表示。
(施耐德疏水减法方程)
表1.采用的色谱条件及考察的相应的色谱能力
其中:
KPB对应是公式中的H相,代表色谱柱的疏水保留能力,采用的标准物为戊苯(PB);
αCH2对应是公式中的H相,代表色谱柱的疏水选择性能力,表示色谱柱区分具有不同疏水性差异物质的能力。采用的标准物为戊苯(PB)和丁苯(BB);
αT/O对应的是公式中的S相,代表色谱柱的空间位阻选择性能力。采用的标准物为三亚苯(T)和邻三联苯(O);
αC/P对应的是公式中的A和B相,代表色谱柱的羟基活性,采用的标准物为咖啡因(C)和苯酚(P)
αB/P(pH7.6)对应的是公式中的C相,代表色谱柱在pH=7.6时的离子交换能力,采用的标准物为苄胺(B)和苯酚(P);
αB/P(pH2.7)对应的是公式中的C相,代表色谱柱在pH=2.7时的离子交换能力,采用的标准物为苄胺(B)和苯酚(P);
Note:*实验采用等度方法,为注明的弱洗脱为纯水。
图1.Zorbax SB-C18 色谱柱雷达图
1.登录ACD官网(www.acdlabs.com)
2.在检索处输入Column,点击Enter。在跳出的窗口中选择ACD/Labs Column Selector。
3.在跳出的窗口中通过下拉菜单选择需要考察的色谱柱,可以同时选择2根色谱柱,点击Submit。
4.软件会根据上述介绍的6个参数对选中的色谱柱进行查考,并给出色谱柱差异因子CDF值。通常CDF值在3以内认为为比较相似的色谱柱。
5.同时网页也会根据第一根选择的色谱柱,根据CDF值由小到大的顺序对所有收录的色谱柱进行排序。
参考文献:
Petar Ž uvela, Bogusław Buszewsk. (2018) Column Characterization and Selection Systems in Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography.
M.R. Euerby and P. Petersson. (2003). Chromatographic classification and comparison of commercially available reversed-phase liquid chromatographic columns using principal component analysis. J. Chromatog
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