【攻略】ADME：键合金刚烷基色谱柱的使用攻略

在常规液相色谱分析中，反相C18（ODS）色谱柱可满足绝大多数化合物的分析。但是大家应该也遇到过强极性物质保留弱/不保留的情况。这种情况下，一般的思路是：

★调整流动相
★尝试其他种类反相柱（C8、C4、CN、C1等）
★在100%水相流动相条件下，使用高极性色谱柱进行分析

★改变分离模式——从反相模式到HILIC模式

上面的方法对于极性化合物的分析也许有效，但如果是强极性化合物和疏水性化合物共同分析，怎么办？

有个简单有效的方法，你想尝试吗？

在原来开发的反相条件下，仅通过更换色谱柱，就能对多种极性不同的化合物进行同时分析，且能得到良好保留与分离，如果您有这种需求——

CAPCELL PAK ADME色谱柱

你、值得拥有~

今天YoYo将结合各种分析例，阐释CAPCELL PAK ADME色谱柱与常规C18柱相比，对于多种极性不同化合物同时分析时的优势~

本篇干货数据的阅读时间大约需要10min~准备好了吗~Let''s go~

CAPCELL PAK ADME色谱柱键合立体笼状结构官能团——金刚烷基团，因此具有与常规C18色谱柱完全不同的表面特性，在极性较强化合物的分析中有独特的优势，兼具疏水选择性和笼状结构的立体选择性，能够对一些具有微小差异的化合物进行有效分离，在药物代谢分析中也表现出明显的优势。

▲CAPCELL PAK ADME色谱柱和常规C18色谱柱对10种标准物质的分析色谱图

如上图，可以看到，具有极性部位的苯甲酸甲酯保留程度较苯更强。CAPCELL PAK ADME色谱柱对强极性化合物（峰1-4）具有较强保留，同时，对萘的保留程度与C18色谱柱相当。

同时我们注意到，苯甲酸甲酯和苯在C18与ADME色谱柱上的出峰顺序也发生了翻转，也印证了ADME与C18截然不同的保留模式，而这种特殊的保留模式，也许将为您的分析带来意想不到的收获。

CAPCELL PAK ADME色谱柱在对极性化合物进行良好保留的同时，对疏水性化合物也能有良好保留。

CAPCELL PAK ADME色谱柱可在反相模式下使用，因具有特殊的疏水性和表面极性，所以可以实现常规C18色谱柱所无法实现的分离。

下面将通过黄嘌呤类化合物和色氨酸代谢物的两个分析例，将ADME与常规C18色谱柱的分析行为进行比较。

对咖啡因，可可碱，茶碱和他们的代谢产物——1,7-二甲基尿酸，1-甲基黄嘌呤及3-甲基黄嘌呤进行共同分析，结果表明，CAPCELL PAK ADME色谱柱所得分离度和理论塔板数均较好，与常规C18色谱柱和高极性C18色谱柱相比，对高极性化合物能得到更好的保留与分离。

▲CAPCELL PAK ADME和C18色谱柱对黄嘌呤类化合物的分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱规格：4.6 mm i.d. x 150 mm

流动相：0.1 vol% 甲酸, 水 / 乙腈 = 90 / 10

流　速：1 mL/min

柱　温：40 ˚C

检测器：UV 254 nm

进样量：5 μL

样　品：1. 3-甲基黄嘌呤　2. 1-甲基黄嘌呤　3. 可可碱　4. 1,7-二甲基尿酸　5. 茶碱　6. 咖啡因

在梯度条件下对色氨酸及其代谢产物进行分析，CAPCELL PAK ADME色谱柱对极性较强的代谢产物得到良好保留与分离，此数据表明ADME也非常适合梯度分析。

▲CAPCELL PAK ADME和C18色谱柱对色氨酸代谢产物的分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱规格：ADME S3; 4.6 mm i.d. x 100 mm

　　　　　　ADME S5; 4.6 mm i.d. x 150 mm

流动相：A) 10 mmol/L 甲酸铵缓冲液(pH4)　

　　　　B) 乙腈

　　　　[S3] B 5% (0 min) -> 25% (13.3 min) -> 5% (13.4 min)

　　　　[S5] B 5% (0 min) -> 25% (20.0 min) -> 5% (20.1 min)

流　速：1 mL/min

柱　温：40 ˚C

检测器：UV 254 nm

进样量：1 μL

样　品：1. 尿嘧啶　2. 3-羟基犬尿氨酸　3. 犬尿氨酸

　　　　4. 色氨酸　5. 3-羟基-2-氨基苯甲酸

　　　　6. 邻氨基苯甲酸

CAPCELL PAK ADME对于强极性化合物能实现良好保留与分离，下图为对实际生药样品的保留。

▲CAPCELL PAK ADME色谱柱和C18色谱柱对天然物质（生药）的分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱规格：4.6 mm i.d. x 150 mm

流动相：A) 水　B) 乙腈

　　　　B) 10% (0 min) -> 50% (15 min) -> 80% (20 min)

流　速：1 mL/min

柱　温：40 ˚C

检测器：UV 248 nm

进样量：5 μL

CAPCELL PAK ADME S3色谱柱与C18色谱柱相比，整体保留更强，且能得到更好分离。

分别使用全多孔型填料的CAPCELL PAK ADME和核壳型填料的CAPCELL CORE ADME两款色谱柱，对胆固醇生物合成路径的8种甾类激素和炔雌醇进行分析。

▲胆固醇生物合成路径

▲8种甾类激素和炔雌醇的分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱：①CAPCELL PAK ADME S5 ; 4.6 mm i.d. x 150 mm

　　　　②CAPCELL CORE ADME S2.7 ; 2.1 mm i.d. x 50 mm

流动相：A) 5 mmol/L 甲酸铵　B) 乙腈

　　　　① B 20 %(0 min) -> 55 %(30 min) -> 20 % (30.1 min)

　　　　② B 20 %(0 min) -> 55 %(10 min) -> 20 % (10.1 min)

流　速：① 1 mL/min　② 400 μL/min

柱　温：40 ˚C

检测器：UV 220 nm

进样量：① 5 μL　② 25 μL

样　品：1. 醛固酮　2. 氢化可的松　3. 可的松

　　　　4. 泼尼松龙　5. 雌二醇　6. 睾酮

　　　　7. 雌酚酮　8. 炔雌醇　9. 17α-羟孕酮

将CAPCELL CORE ADME色谱柱的流速提升一倍时，可得到与CAPCELL PAK ADME色谱柱同等程度的分离效果，缩短分析时间。

因此，如果您使用CAPCELL PAK ADME色谱柱开发了合适的分析方法，直接将色谱柱更换为CAPCELL CORE ADME，同时提高流速，这样的做法可以实现快速分析，提高分析效率。

四肽Arg-Gly-Asp-Ser是细胞吸附性蛋白质所共有的细胞吸附活性配列 (Arg-Gly-Asp)。以下是四肽和五肽的分析示例。

▲CAPCELL CORE ADME色谱柱对肽类的分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱规格：2.1 mm i.d. x 100 mm

流动相：A) 0.1 vol% 三氟乙酸, 水

　　　　B) 0.1 vol% 三氟乙酸, 乙腈

      　　B) 1% (0 min) -> 10%(10 min) ->1%(10.1min)

流　速：200 μL/min

柱　温：35 ˚C

检测器：PDA 210 nm

进样量：1 μL

样　品：1. 四肽  Arg-Gly-Asp-Ser (M.W. 433.4)

　　　　2. 五肽  Gly-Arg-Gly-Asp-Ser (M.W. 490.5)

对强极性小分子肽得到了充分保留，四肽与五肽得到了良好分离。

综上，我们对导入金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME色谱柱对于极性化合物的保留行为进行了考察，可以看出CAPCELL PAK ADME色谱柱对强极性化合物的保留作用良好。

另外，核壳型色谱柱CAPCELL CORE ADME对于强极性化合物也能得到良好的保留与分离，通过分析条件平移，可实现较CAPCELL PAK ADME色谱柱更快速的分析。

因此可以得出结论，CAPCELL PAK ADME和CAPCELL CORE ADME色谱柱可以对常规C18色谱柱所无法保留的强极性化合物进行良好保留，并且因其能在反相模式下使用，故可作为改善C18色谱柱分离效果的“第二选择”色谱柱。

*因为我们比较谦虚，本文中所有“第二选择”色谱柱的范围仅限于大曹三耀产品线~第一选择当然是MGII啦~