蛋白质及核酸分析用SEC色谱柱的选择

尺寸排阻色谱 (SEC) 是一种基于分子尺寸的分离方法，在生物大分子的分析中被广泛使用。多数情况下，SEC分析过程中分析对象不会发生变性。SEC在蛋白质 (含肽) 和核酸 (寡核苷酸、DNA、RNA) 的品质管理等方面，多用于对精制品中所含的二聚体和多聚体等立体异构体、杂质的分析。

此外，为了减小样品立体结构的影响，并且防止疏水相互作用，有时会在洗脱液中添加变性剂或有机溶剂等。在这种特殊的洗脱液中，蛋白质和肽会发生变性，变为无规则的线团状，与一般缓冲溶液的洗脱液相比，仅样品的分子尺寸就会增加数倍，所以在SEC色谱柱的选型上需要加以注意。

下表总结了分析蛋白质、肽、核酸等样品时可选择的TSKgel SEC色谱柱型号、洗脱液条件和分子量分离范围。

▼SEC色谱柱型号对应的洗脱液条件和分离范围

Ref.: Handbook of Size Exclusion Chromatography, 1995, Chromatographic Science Series, edited by J. Cazes以及文献：Y. Kato, LC.GC, 1: 540 (1983)

● 肽的SEC分析示例（使用含有机溶剂的洗脱液）

● 人血清白蛋白的SEC分析示例

● 寡核苷酸的SEC分析示例

核酸的分离范围因核酸的二级结构、立体结构等而有所不同，另外在分析500碱基对以上的DNA时，使用TSKgel G5000PWXL、G6000PWXL、G-DNA-PW等产品。关于更多TSKgel色谱柱分析寡核苷酸的应用实例可参考往期推文：→寡核苷酸类药物的HPLC分析

以上是对蛋白质、肽、核酸分析SEC色谱柱的选择方法做了简单总结，供大家参考和使用。如您有色谱柱选型方面的问题，欢迎随时联系我们！