制备合格的微生物培养基，这些药典变化你一定要知道！

微生物检验中，几乎每个实验都要使用到培养基。培养基，就像大海中的灯塔、黑暗屋子中的手电筒、观察天体的天文望远镜，使得小小的菌种形态肉眼可见。

就是这么一个特殊的物料，可以直接影响到微生物实验的成败，实验手法再好，没有好的配置，很多事情无法达成，那么我们就一起来探讨一下，2020版药典中关于培养基内容的变化点和微生物实验室对于培养基管理应该注意哪些问题。

【培养基】章节中【培养基的制备和培养条件】

1、关于自制培养基的包装方式及效期

2015版：制备好的培养基应保存在2-25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内实验；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

2020版：制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2-25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。

分析及建议：

从15版过渡到20版，一个很明显的变化就是：明确了即使是自制的培养基，也应至于无菌密闭容器中贮存，那么所谓的无菌密闭容器常规的微生物实验室会用到几种方式呢？

A、生产产线直接制备

公司生产产品本身为大输液瓶，每年生产间歇直接制备培养基少批多量留存

优点：密封性佳，与产品一般无二

缺点：可遇不可求

B、输液瓶胶塞加铝盖，手动轧盖机轧盖

配制完毕加胶塞及铝盖，手动轧盖机轧盖后灭菌

优点：操作方便

缺点：因加胶塞铝盖一般在一般控制区，普通环境，胶塞铝盖瓶口容易污染，培养基灭菌温度及时间不足以杀灭芽孢等难灭菌种，另外因手工轧盖，其密封性不均一，有污染可能；另外灭菌期间有培养基喷瓶及裂瓶可能。

C、输液瓶配旋口瓶，瓶口中心为胶塞

配制完毕，直接旋口，但不旋紧，留存蒸汽通路，灭菌时外包装加TP包装袋，Tyvek面保证蒸汽通路，灭菌完毕，隔着TP包装将瓶口旋紧，保存时瓶外带着TP包装，增加一层防护。

优点：操作方便、经济（不另购置设备）

缺点：因瓶外带有TP包装灭菌，因此每批灭菌器装载量会降低

其实不管用哪种方式，对于自配培养基来说，最重要的是保证包装的密封性，以确保培养基贮存阶段和使用时的无菌性。

其实大家可以算一笔帐，如果说配制需要人力、物力、灭菌设备能耗、时间成本的花费，如果有质量保证且价格合适的商品化的预制琼脂或液体培养基，对于实验室来说不失为一个更好的选择，“培养基外包”大势所趋，可以让微生物人专注于技术，让专业的品牌和团队提供专业的培养基产品，当然，前提是筛选出品牌优质、资质可靠、产品质量合格的供应商。

另外在本条中也删去了培养基贮存效期的建议时间，是非常科学开明的一种改变，因为使用培养基的标准并不是规定的时间，而是其外观性状、无菌性、灵敏度均符合要求。

2、关于硫乙醇酸盐流体培养基FTM的氧化层高度

2015版：在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5

2020版：在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/3

分析及建议：

这点和两点有关，第一、FTM培养基本身配方中刃天青的特性，第二、培养基包装密封性。

自配FTM培养基一定会面临“两难“问题：

第一、若瓶内培养基装量多，氧化层的问题解决，但灭菌验证时灭菌难灭透，生物指示剂不是每瓶都合格。

第二、若减少瓶内培养基装量，导致瓶内空气过多，贮存过程中氧化层的高度无法达到其使用前药典要求。

解决FTM最好的方法，个人建议还是采购商购培养基最省心，其配方中的FTM成分经特殊处理或瓶内充氮，可有效保证氧化层的问题，贮存效期也比较长，且现在有些优质的微生物品牌在国内建了培养基生产基地，其生产管理及产品品质都非常不错，商购培养基的供应商审计中的适用性审计，实验室做确认实验需要花费不少时间，所以供应商的筛选非常重要，择到“一次性成功率高”且“技术团队实力过硬”的供应商也能免去很多时间和问题。

【培养基】章节

1、首次提出商品化脱水培养基或预制培养基的接收标准

2015版：无

2020版：商品化的脱水培养基或预制培养基应设立接收标准，并进行符合性验收，包括品名、批号、数量、生产单位、外观性状（瓶盖密封度、内容物有无结块霉变等）、处方和使用说明、有效期、贮藏条件、生产商提供的质控报告和/或其他相关材料（如配方变更）。

分析及建议：必须对商购的干粉和预制培养基进行验收，本身干粉容易吸潮，预制培养基本来就是菌种生长的温床，比无菌产品更难生产和伺候，药典出标准，依据执行即可，本条加的非常好！

2、首次提出自配培养基及其外包装的外观检查标准

2015版：无

2020版：制成平板或分装于试管的培养基应进行下列检查：容器和盖子不得破裂，装量应相同，尽量避免形成气泡，固体培养基表面不得产生裂缝或涟漪，在冷藏温度下不得形成结晶，不得污染微生物等。

分析及建议：15版的时候没有标准，自己实验室设定了外观标准，因为外观是第一道防线，本次药典中增加自制培养基的外观标准，其实同样适用于商购预制培养基的外观检查，依内容执行即可。

3、首次提出微生物实验室应建立培养基相关文件及记录相关内容

2015版：无

2020版：实验室应有文件规定微生物实验用培养基、原材料及补充添加物的采购、验收、贮藏、制备、灭菌、质量检查与使用的全过程，并对培养基的验收、制备、灭菌、贮藏(包括灭菌后）、质量控制试验和使用情况等进行记录，包括培养基名称、制造商、批号、表观特性、配制日期和配制人员的标识、称量、配制及分装的体积、pH值、灭菌设备及程序等，按处方配制的培养基记录还应包括成分名称及用量。

分析及建议：其实没有这条，相信每个微生物实验室都会有培养基的管理制度或操规，本条规定的面比较全也比较细，撰写文件和设计记录的时候可有依据，主要问题是培养基的管理细节落实到实处比较重要。

4、关于环境监控培养基的规定

2015版：用于环境监控的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养，以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。

2020版：用于环境监控的培养基须特别防护，以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。

分析及建议：删去了100%预培养的内容，如果商购预制平皿，不存在此问题，均为终端灭菌产品，但自配培养基就比较麻烦，全部预培养，其实必要性不强，培养基到底预培养多少温度和多少时间合适？在预培养中失水率无法控制，可能影响后续实验中捕捉到的菌种生长。本条删除相关内容，是比较合理的。

综上，2020版中国药典在微生物培养基方面的变化，让我们欣喜的发现，确实变得越来越科学和有逻辑，在与国际药典接轨的同时也保留着中国特色，更符合中国制药行业国情的需求，也让中国的制药微生物实验室的自主性更强，期待更多质量好且性价比高的商品化预制培养基产品在市场上涌现，能减轻微生物检验人员的负担，同时也能平衡实验室的成本。