GB 4789.4-2024沙门氏菌检验标准变更解读

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新标准

旧标准

设备与材料

新标准增加了恒温装置及其温度指标（42℃±1℃、48℃±2℃）、生物安全柜

增加了无菌量筒、均质杯、广口瓶、小波管、接种环

培养基与试剂

新标准以氯化钠孔雀绿大豆胨(RVS)增菌液，替代亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液，进行增菌

亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液

增加了营养琼脂(NA)、半固体琼脂

检验程序

新标准用RVS代替SC，作为食品中沙门氏菌检验的选择性增菌液，培养温度为42℃，且TTB培养时间增加了一个36℃，流程中补充了生化试剂盒鉴定。

样品前处理

新标准规定，对于乳粉，无菌操作称取25g样品，缓缓倾倒再广口瓶或均质袋内225mL BPW的液体表面，勿调节pH，也暂不混匀，室温静置60min±5min后再混匀，置于36℃±1℃培养16h-18h。

冷冻样品如需解冻，取样前在40℃-45℃的水浴中解冻不超过15min，或在2℃-8℃冰箱缓慢化冻不超过18h。

如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min或2℃-5℃不超过18h解冻。

增菌阶段

轻轻摇动预增菌的培养物，移取0.1mL转种于10mL RVS中，混匀后于42℃±1℃培养18h-24h。同时，另取1mL转种于10mL TTB中后混匀，低背景菌的样品（如深加工的预包装食品等）置于36℃±1℃培养18h-24h，高背景菌的样品（如生鲜禽肉等）置于42℃±1℃培养18h-24h。如有需要，可将预增菌的培养物在2℃-8℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。

轻轻摇动培养过的样品混合物，移去1mL转种于10mL TTB内，于42℃±1℃培养18h-24h。同时，另取1mL转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18h-24h。

生化实验

挑取4个以上典型或可疑菌落进行生化试验，这些菌落宜分别来自不同选择性增菌液的不同分离琼脂；也可先选其中一个典型或可疑菌落进行试验，若鉴定为非沙门氏菌，再取余下菌落进行鉴定。

自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落。

初步判断为非沙门氏菌者，直接报告结果。对疑似沙门氏菌者，从营养琼脂平板上挑取其纯培养物接种蛋白胨水（供做靛基质试验），尿素琼脂（pH7.2），氰化钾（KCN）培养基，也可在接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱氢酶试验培养基的同时，接种以上3种生化试验培养基，于36℃±1℃培养18h-24h，后判断结果。

接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验），尿素琼脂（pH7.2），氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种，于36℃±1℃培养18h-24h，必要时可延长至48h，后判定结果。

符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应，进行血清学鉴定后报告结果。尿素、氰化钾和赖氨酸脱羧酶中如有1项不符合A1，按表4进行结果判断；尿素、氰化钾和赖氨酸脱羧酶中如有2项不符合A1，判断为非沙门氏菌并报告结果。

反应序号A1:典型反应判定为沙门氏菌属，如尿素，KCN、赖氨酸脱羧酶中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌，如有2项异常为非沙门氏菌。

如选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统，用分离平板上典型或可疑菌落的纯培养物，或者根据表2初步判断为疑似沙门氏菌的纯培养物，按生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统的操作说明进行鉴定。

如选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统，可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备或浊度适当的菌悬液，使用生化试剂鉴定盒或微生物生化鉴定系统进行鉴定。

血清学鉴定

一般采用琼脂含量为1.2%-1.5%的纯培养物进行玻片凝集试验。首先进行自凝性检查，在洁净的玻片上滴加一滴生理盐水，取适量待测菌培养物与之混合，成为均一性的浑浊悬液，将玻片轻轻摇动30s-60s，在黑色背景下观察反应（必要时用放大镜观察），若出现可见的菌体凝集，即认为有自凝性，反之无自凝性。对无自凝的培养物参照下面方法进行血清学鉴定。

一般采用1.2%-1.5%琼脂作为玻片凝集试验的抗原。首先排除自凝集反应，在洁净的玻片上滴加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的浑浊悬液，将玻片轻轻摇动30s-60s，在黑色背景下观察反应（必要时用放大镜观察），若出现可见的菌体凝集，即认为有自凝性，反之无自凝性。对无自凝的培养物参照下面方法进行血清学鉴定。