生物探索 | 不同色谱柱硬件对合成寡核苷酸液相质谱分析的影响

虽然，通过优化离子对色谱流动相的比例能有效地提高色谱分离的效果，但是这也无法改变寡核苷酸对传统不锈钢色谱柱硬件中微量金属的螯合作用。在这里，我们通过对两种合成寡核苷酸的液相质谱分析来对比传统不锈钢色谱柱和BioTi（多层钛合金柱管提供生物惰性通道）硬件色谱柱对分析结果的影响。

当通过LC-MS分析双链RNA的时候，如图1所示，我们观测到非特定的相互作用。结果显示，在反链峰被洗脱下来前我们看到了一个分叉峰，通过MS/MS扫描后我们确定这个分叉峰是同一个分析物。反之，如图2所示，通过使用BioTi生物惰性硬件的色谱柱则有效地清晰分离双链RNA中的正反链并且通过质谱数据的验证。此外，我们还观测到在使用带有BioTi硬件的色谱柱时，分析结果的灵敏度，峰高以及峰面积有显著的提高。从而表明BioTi能有效地在低浓度离子对试剂及HFIP条件下对寡核苷酸进行表征分析。

这种在电离方面的改进也可以在单链核酸分析中观测到。通过对Nusinersen的分析发现BioTi能有效地改善色谱柱的灵敏度; 如图3所示，与使用不锈钢硬件的色谱柱结果对比，使用bioZen Oligo（BioTi硬件）时，分析灵敏度有了大幅度的提高。同时，此两款色谱柱的色谱填料是同一个批次的填料。

梯度：5-30 % B 于14分钟内 （图1）

流速：0.3 mL/min

进样量：12.5 ng

温度：55 °C

检测器：TOF-MS

样品：siRNA

图3：使用不锈钢硬件与生物惰性硬件，

Nusinersen 在LC-MS上分析效果的对比