2021-09-01 18:45:30, 赛多利斯 德国赛多利斯集团
硫酸乙酰肝素糖蛋白-2(Glypican-2,GPC2)是一种高度表达的、MYCN 驱动的小细胞肺癌 (SCLC) 癌蛋白,在 SCLC 和神经母细胞瘤干细胞区室中均具有显著富集表达。将一种人 GPC2 抗体(D3)与 DNA 破坏性吡咯并苯二氮卓(PBD)二聚体连接制成ADC(抗体药物偶联物),并结合GPC2的肿瘤特异性位点。近期,费城医院的研究人员将此研究成果发表于《Cell Report Medicine》杂志 [1]。
本项研究采用了Octet®分子互作系统,Incucyte®实时活细胞成像系统和iQue®高通量流式细胞术,来进行高效的细胞和蛋白分析。那到底用他们来干什么呢?
Octet®分子互作系统——靶点亲和力测试
第一个出场的是药物研发必备的设备之一——Octet®分子互作系统,本文主要用于ADC亲和力的鉴定。
通过解析 D3-GPC2-Fab/GPC2复合物 的 3.3 A˚ 分辨率下晶体结构,鉴定出GPC2上与D3的结合位点(F95,K106,R103,R397等),对这些位点突变后,与野生型相比,D3亲和力下降,Octet®表明了这些关键结合位点的重要性。
将GPC2固化在NTA传感器上,与不同浓度的D3-GPC2-Fab结合(Octet® RED96)
Octet®的生物层干涉技术(BLI)不仅可以用来检测结合速率常数以及解离速率常数等动力学参数,还可以用来进行蛋白浓度测定,以及竞争实验。主要优势是通量高,操作简单,使用成本较低。是一种被美国药典收录的非标记技术(点这里)。
Incucyte®实时活细胞成像系统——抗体内化
抗体的一个重要特性是细胞内化的程度和速率。抗体偶联药物(ADC)的作用机制是向细胞内输入细胞毒性物质引起细胞毒性杀死肿瘤细胞,其特异性和细胞的摄取程度对ADC的有效性和安全性至关重要。而抗体内化往往在几个小时内完成,需要一种可以实时成像的设备(边内化边拍照)进行实时跟踪拍摄,Incucyte®长时间活细胞实时分析系统可实现长达数天、数周、甚至数月的连续拍照和自动实时分析,轻松应对抗体内化分析过程。
Incucyte®实时检测抗体内化原理示意图
左图显示,GPC2能够增强ADC的内化。右图显示,该ADC在不同的神经胶质瘤和小细胞肺癌细胞系中内化程度不同
在药物发现领域,Incucyte®还可以用于ADCC、ADCP、CDC以及免疫细胞杀伤等应用。其特点就是可以放置于培养箱中进行实时成像,避免频繁取出检测造成的人为误差和细胞损伤。
iQue®高通量流式细胞术——膜蛋白特异性结合高通量筛选
为了检测ADC是否只与GPC2特异性结合,而不与细胞表面其他膜蛋白产生结合,将含有6000个膜蛋白的克隆库表达到HEK293T细胞上,加入该ADC,使用iQue®高通量流式细胞仪检测,发现ADC不与其他任何膜蛋白有特异性结合,只与GPC2结合。
该ADC不与其他任何膜蛋白有结合,只与GPC2结合
iQue®高通量流式可不是一般的流式,而是流式中的战斗机!试问市面上有仪器能够做到5分钟检测一块96孔板,15分钟检测一块384孔板吗?iQue®可以!6000个克隆,每个克隆3个复孔,188块96孔板, iQue帮您2天搞定!
Summary
总结
这篇文章通过细胞实验和PDX模型实验,证明这种 ADC 能对神经母细胞瘤和小细胞肺癌诱导持久的肿瘤消退,这种杀伤是通过诱导 DNA 损伤的细胞凋亡产生,且并未发现 ADC 诱导的体内毒性迹象。这些研究提供了临床前数据,以支持靶向 GPC2 的 ADC的临床转化。
赛多利斯生物分析三剑客——Octet® ,Incucyte® ,iQue®——速度快,通量高,低成本,实时分析。无论在药物研发还是在基础研究中,都可以分别在分子互作水平,细胞互作水平和细胞成像水平检测中提供更快的、更方便、更可信的解决方案,让大家在竞争激烈的市场中占有一席之地!
赛多利斯生物分析三剑客Incucyte® | iQue® | Octet®
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-参考文献-
[1] Raman et al., A GPC2 antibody-drug conjugate is efficacious against neuroblastoma and small-cell lung cancer via binding a conformational epitope. Cell Reports Medicine, 2021
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