使用固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法对牛奶中阿维菌素类药物进行多残留测定

使用固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法对牛奶中阿维菌素类药物进行多残留测定

作者：吴翠玲,屈龙,黄悯嘉

兽药在治疗或防止动物疾病、促进动物生长、提高饲料效果等方面起着十分重要的作用，被广泛地用于畜牧业中。然而，由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。滥用兽药极易造成肉、蛋、奶等动物源食品中有害物质的残留，这些药物残留给人的健康带来潜在的危害，包括过敏反应，直接中毒效应，以及对抗生素产生抗药性等。

阿维菌素 (Avermectin)、伊维菌素 (Ivermectin)、埃普利诺菌素 (Eprinomectin) 和多拉菌素 (Doramectin) 是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，是一类被广泛使用的农用或兽用杀虫、杀螨剂。本文所述方法参照食品安全国家标准GB 29696-2013，建立了牛奶中这四种阿维菌素类药物多残留分析的高效液相色谱法。

样品前处理过程

称取试料 (5+0.05) g 于 50 mL 离心管中，加乙腈 8 mL，涡旋混合 1 min，超声 1min，4500 r/ min 离心 10 min，取上清液于另一 50 mL 离心管中。残渣中加乙腈 8 mL，重复提取一次，合并两次上清液，加水 20 mL、三乙胺 50 μL，混匀，待固相萃取净化，固相萃取操作流程见下图 1。

图 1. 固相萃取操作流程图

于待衍生的离心管中依次加衍生化试剂 A（N-甲基咪唑:乙腈 = 1:1）100 μL，加盖密闭，涡旋混匀 10 s，再加入衍生化试剂 B（三氟乙酸酐:乙腈 = 1:2）150 μL，依次加冰醋酸 50 μL 和三乙胺 50 μL，涡旋混匀 10 s，于室温密闭反应 30 min，加甲醇 650 μL 混匀。过滤，供高效液相色谱法测定，色谱条件见表 1。

表 1 液相色谱条件

本文所述固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法可实现对奶产品中阿维菌素、伊维菌素、埃普利诺菌素和多拉菌素的基线分离和检测，方法检出限为 1 μg/kg，定量限为 2 μg/kg。对比阿维菌素类药物标准样品与牛奶空白基质的色谱叠加图（图 2）可以看出，在空白基质色谱图中阿维菌素类药物的出峰位置处无杂峰干扰，表明本文所用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱的净化效果优异，可有效去除大部分干扰杂质。

图 2. 50 ng/mL 阿维菌素类药物标准样品（蓝色）与牛奶空白基质（红色）的色谱叠加图

如图 3 所示，在线性范围 5 - 1000 ng/mL 内埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的线性相关性良好。在添加水平 2 -40 μg/kg 下，牛奶中各阿维菌素类药物的加标回收率为 90.43% -102.79%，RSD ≤ 8% (n=3)，如表 2 所示。牛奶中各阿维菌素类药物添加水平 10 μg/kg 时，连续进样 6 次，所得色谱叠加图如图 4 所示。其中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的峰面积 RSD 值分别为 0.20%、0.17%、0.29% 和 0.82%，结果表现出极高的重复性。

图 3. 埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的标准曲线

表 2. 牛奶基质中各阿维菌素类药物的加标回收率

图 4. 牛奶中添加 10 μg/kg 阿维菌素类药物的样品连续进样 (n=6) 所得色谱叠加图

综上所述，本文所述方法利用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦专利的 Poroshell 120 EC-C18快速柱对目标物进行快速分析，方法检出限、定量限、准确度和精密度均满足 GB 29696-2013 的分析要求。

耗材订购信息

Agilent 可控针阀：部件号 12131005

Agilent Vac Elut 20 固相萃取装置：部件号 12234103

Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱：500 mg，6 mL，30/pk，部件号 12102052

Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱：4.6 X 100 mm，2.7 μm，部件号 695975-902

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