流动相的储存和冲洗

流动相的储存

1、定期更换流动相，避光首选棕色瓶

流动相与仪器的管线和色谱柱直接接触，保持流动相处于良好的状态，有利于保持仪器和色谱柱的良好性能。

2、流动相变质对液相色谱分析的影响

影响流动相变质的因素主要来自光照、温度和氧化，水、缓冲盐和大部分有机相随着时间的推移都会变质，只要组成流动相的成分发生了变化，流动相的极性就发生了变化，从而导致保留时间漂移、重现性差。

3、缓冲盐的存放与更换

不少用户都很关心如何保存缓冲盐，如何延缓缓冲盐变质的过程，延长使用时间？这就需要尽量来选择棕色瓶来减少光照的影响，比如缓冲盐配多了，多配的缓冲盐要密封保存并放入冰箱冷藏，减少温度带来的影响。

如果保存得好，处于冷藏的环境下缓冲盐能保存大约一周的时间，如果保存的不好，带来的影响甚至是不可逆的，尤其是对色谱柱的影响。所以如果配缓冲盐不是很复杂，最稳妥的方法是现用现配。

4、水应何时更换

如果同一个方法中的有机相受光照的影响比较小，可用棕色瓶放水，以此减少光照的影响，建议每天都换水，至少两天换一次，比起水变质对系统和色谱柱的影响来看，还是经常换水来得更方便。

注意：若仪器长时间不开机，放水的瓶子或者管线里同样会滋生微生物，所以一定要记得要把溶剂瓶里的水换成有机相，然后开机把管线里的水置换掉。

 5、有机溶剂的稳定性

一部分常用的有机溶剂的稳定性很差，比如像四氢呋喃、氯仿和二氯甲烷等氯代溶剂，对于这种稳定性差的溶剂建议大家购买小体积包装的有机溶剂。

注意：

（1）每次取完溶剂之后，要小心把瓶盖拧紧来减少氧气的影响；

（2）对于乙腈这样比较稳定的有机溶剂，若长时间不使用仪器，要避免纯的乙腈充满整个液相系统，防止乙腈产生的聚合物对仪器有所影响。

流动相的冲洗

1、冲洗系统细节多，尤其注意缓冲盐

在开始实验之前，我们需要冲洗并稳定系统，在实验结束之后，我们也需要使用适当的溶剂冲洗并保护系统。

2、置换系统流动相需要冲洗多长时间

其实我们很难用时间准确的说明这个问题，因为冲洗时间会受流速和柱体积的影响。

所以这里建议大家用冲洗体积来计算，由于液相系统中的管线和色谱柱都比较细，流速相对比较慢，所以流动相置换的过程是比较慢的，需要5~10倍以上的系统体积才能完全置换原有的流动相（并非专业术语，仅做问题举例），所以只用知道系统体积即可。

系统体积包含仪器管线体积和色谱柱体积，比如管线体积是1ml，色谱柱的空余体积是3ml，系统体积就是4ml，用至少5倍的流动相冲洗，也就是需要20ml，10倍体积相当于40ml。有了冲洗体积，结合流速，自然就能计算出到底需要多长时间才能把体系置换好，冲洗干净，比如，流速1ml/min时，大概需要20~40分钟才能完全置换系统中原有的流动相。

3、实验结束之后用什么溶剂保护体系

溶剂的选择取决于色谱柱的类型，比如反相体系，色谱柱的体系基本为C8、C18类的，甲醇和乙腈是比较合适的溶剂，只是注意乙腈不能长期保存在液相系统中，因为乙腈有聚合的问题；

若是正相体系，比如氨基柱、氰基柱等正相色谱柱，正己烷是比较合适的溶剂，如果是离子交换柱，用水冲洗体系即可。

4、如何冲洗缓冲盐

需要格外注意的是，缓冲盐在有机相中是不溶解的，所以千万不能用有机相直接冲洗缓冲盐体系，否则盐颗粒析出会堵塞管线和色谱柱，一定要有过渡。

这里建议分三个阶段冲洗缓冲盐体系：

（1）用大比例水，小比例有机相冲洗一段时间，这样可以保证顺利的冲走大部分盐；

（2）加大有机相的比例再冲洗一段时间；

（3）根据冲洗体积的计算，确保缓冲盐已经完全被置换了之后再改为100%的有机相冲洗一段时间。