AP-MALDI 筛查 SARS-CoV-2 新冠病毒 S 蛋白

AP-MALDI（ng）离子源（MassTech, Inc.，固态 Nd:YAG 激光器，波长355 nm）

AP-MALDI 源与 Q Exactive HF 质谱仪（QE-HF，Thermo）联用检测 SARS-CoV-2 中的 S 蛋白。该方案同样适用于其他品牌的质谱，如安捷伦和 SCIEX 等。

试剂：乙腈(ACN)、水(H2O)、甲醇(MEOH)、三氟乙酸(TFA)，均为色谱级。

1. AP-MALDI 基质：10 mg/mL CHCA，溶剂为70:30（v/v）ACN:0.1% TFA 水溶液。

2. 制备 AP-MALDI 多肽校准标准液，在70/30 ACN:0.1% TFA（水中）中浓度为10 pmol/mL，用于信号优化，5 μL 肽混合物和5 μL CHCA 按1:1混合。

3. 取1 μL 完全混合的上述标准溶液，在干净的常规192孔 MALDI 靶板上点靶，风干。

该方案可应用于血液（血浆或血清）、唾液、鼻咽（NP）液和组织。以血浆为案例。

1. 1000 μL 冰甲醇加入200 μL 血浆中，涡旋混合30秒并在冰上储存30分钟，离心10分钟。去除上清液，在水中以0.1%TFA 重新悬浮颗粒。采用 BCA 法测定蛋白质含量。

2. 使用试剂盒酶解沉淀蛋白样品的胰蛋白酶。

3. 酶解后，使用快速真空干燥反应混合物，并将其重新悬浮在50 μL 的0.1%TFA 的水中，样品储存在-20°C 直到分析。

4. 混合 MALDI 基质和样品溶液1:1，取1 μL 混合液到 MALDI 靶板。

1. 将靶板点样后放入 AP-MALDI。

2. 基于多肽混标的参数设置如表1。

3. 按表1的设置采集样品的质谱图，观察是否存在特异性多肽的信号，示例参见图3。

● 文献来源

SARS-CoV-2 Spike Protein Detection using AP-MALDI Mass Spectrometry

Daniel J. Deredge¹, Eugene Moskovets², and Jace W. Jones¹

1University of Maryland, School of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Sciences, 20 N. Pine Street, Baltimore, MD, 21201 USA

2MassTech Inc., 6992 Columbia Gateway Dr., Suite #160, Columbia, MD 21046 USA

Keywords: COVID-19, SARS-CoV-2, AP-MALDI

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