TNF-α诱导蛋白-8样分子2介导烧伤小鼠树突状细胞免疫功能障碍及其调节机制

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2（tumor necrosis factor-α induced protein 8 like-2, TIPE2）作为一种新发现的蛋白分子，与肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8家族成员拥有共有序列，被视为此家族成员之一。TIPE2选择性表达于淋巴源性和髓源性细胞，主要表现为对固有免疫及细胞免疫的负向调节作用，抑制激活蛋白（AP）-1和核因子（NF）-κB的活化，且TIPE2基因缺陷细胞呈现出对Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）和T细胞受体信号活化的高反应性。在小剂量脂多糖（LPS）诱导脓毒症小鼠模型中，TIPE2基因敲除组出现明显脓毒性休克反应，并且TIPE2基因表达下调引起持续性淋巴细胞活化，Fas表达增强，促进淋巴细胞凋亡，并引起IL-4、IL-6、IL-12和干扰素（IFN）-γ等细胞因子的生成增多，但TIPE2表达是否影响Treg的免疫功能迄今尚不清楚。

本实验建立小鼠严重烫伤模型，通过采用慢病毒（购自上海吉凯基因公司）转染的方式稳定有效地下调了和上调了DC细胞中TIPE2表达，观察其对DC免疫功能的影响。该研究通过动物体内和体外实验旨在明确TIPE2对DC介导T淋巴细胞免疫抑制功能的影响，为寻求严重感染并发症的防治途径提供新思路。

通过采用慢病毒（购自上海吉凯基因公司）转染的方式稳定有效地下调了和上调了DC细胞中TIPE2表达。

HMGB1(100 ng/ml)刺激活化正常DC组、siRNA-TIPE2转染DC组、TIPE2-RNA转染后DC细胞组24 h后，流式细胞分析结果显示，CD11c、CD80、CD86 及MHC-Ⅱ平均荧光强度在TIPE2沉默DC细胞组显著上调(P＜0.05)，而TIPE2过表达DC细胞组各种分子的表达出现明显降低(P＜0.05)。此外，小鼠烧伤24h后，与假伤组相比，siRNA-TIPE2转染组DC表面分子CD11c、CD80、CD86 及MHC-Ⅱ表达均出现显著上调(P＜0.05)，TIPE2-RNA转染组各种分子表达下调(P＜0.05)。提示TIPE2的表达可能影响小鼠脾脏DC细胞的分化成熟。

在DC细胞的成熟分化中，细胞因子IL-12、TNF-α起到关键作用。在体内实验部分，烫伤24h后，TIPE2-siRNA转染组DC细胞分泌细胞因子IL-12、TNF-α能力较烫伤组明显上调，而TIPE2 RNA转染组IL-12、TNF-α水平显著下调，表明DC细胞内TIPE2表达可能影响细胞因子 IL-12、TNF-α的生成。

CD4⁺CD25^- T细胞为主要的效应性T细胞，其增殖活性对于维持正常的免疫应答起着重要作用。本组资料中，采用WST-8法检测结果发现，通过siRNA沉默DC细胞TIPE2蛋白表达，siRNA-TIPE2转染DC组T细胞增殖活性反而增强（P＜0.05）。体内实验中，siRNA-TIPE2转染组T细胞增殖活性明显增强，TIPE2-RNA转染组T细胞增殖活性显著降低（P＜0.05）。 说明脾脏TIPE2 可影响严重烧伤后小鼠DC 细胞对T 淋巴细胞的免疫增殖活性。

实验中siRNA-TIPE，TIPE2-RNA转染DC细胞后，极化Th2细胞能力减弱，IFN-γ/IL-4浓度比值上升，向Th1细胞方向极化。培养上清中IFN-γ/IL-4比值较正常对照组有统计学差异。DC介导的免疫效应是经T细胞受体信号刺激活化后引起Th1/Th2的漂移，即IFN-γ/IL-4比值升高，极化Th１细胞。但本实验中，下调ＤＣ细胞TIPE2表达显著增加了IFN-γ值，但降低了IL-4值，TIPE2可能抑制ＤＣ介导的Th１极化过程。体内实验中，TIPE2-RNA转染组IL-4值升高而IFN-γ值降低，siRNA-TIPE2转染组L-4值降低而IFN-γ值升高。

一般认为，IL-2与T淋巴细胞增殖密切相关，T淋巴细胞通过自分泌、旁分泌或内分泌的形式产生IL-2，作用于自身或其他T淋巴细胞。转录因子NF-AT家族被视为重要的调节因子之一，在调节细胞因子IL-2的转录及协调其他细胞因子表达中起核心作用。共培养上清中IL-2由效应T细胞分泌，该体内实验结果提示TIPE2在DC细胞介导的T淋巴细胞NF-AT活化中发挥着重要作用，从而进一步影响着DC细胞的对T淋巴细胞的免疫调节功能。

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