2021-01-16 04:28:38 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
摘要
本实验参考2020版中国药典,使用Kinetex EVO C18色谱柱,以0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16)为流动相对甲钴胺供试品溶液进行测试,实验结果显示,供试品溶液中甲钴胺与相邻杂质分离度为3.33,可实现有效分离。
关键词:高效液相色谱法;甲钴胺;Kinetex EVO C18色谱柱;
样品信息
表1. 甲钴胺相关信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备:
高效液相色谱仪,紫外检测器;
试剂材料:
实验用水为屈臣氏蒸馏水,磷酸二氢钾为分析纯试剂,磷酸为色谱纯试剂;
系统适用性溶液:取甲钴胺对照品约5mg,加1mol/L盐酸溶液5.0mL,避光放置1小时,立即加入1mol/L氢氧化钠溶液5.0mL,摇匀。自然光下放置5-10分钟;
供试品溶液:取本品适量,加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液。
对照溶液:供试品溶液用流动相稀释100倍
灵敏度溶液:供试品溶液稀释2000倍
色谱条件
色谱柱:Kinetex EVO C18,5 µm,4.6 × 250 mm;
流动相:0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16);
流 速:1.1 mL/min;
柱 温:35℃;
进样量:20 µL;
波 长:342 nm;
实验结果
表2 系统适用性溶液分析结果
图1. 系统适用性溶液高效液相色谱图
图2. 供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)
实验结论
使用Kinetex EVO C18色谱柱,以0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16)为流动相对甲钴胺系统适用性溶液进行测试,结果表明,供试品溶液中甲钴胺峰与相邻杂质峰分离度为3.33,可实现有效分离。
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