如何提高柱效

如何提高柱效？

柱效(column efficiency)，是指色谱柱保留某一化合物而不使其扩散的能力。柱效能是一支色谱柱得到窄谱带和改善分离的相对能力。

柱效，从名字上理解是色谱柱的分离效果。色谱柱的有效塔板数越大或有效的塔板高度越低，色谱柱的柱效越好，类似于每个塔板的分离效率相同，有效塔板数越多，zui终得到的物质越纯。

柱效率是指溶质通过色谱柱之后其区域宽度增加了多少，它与溶质在两相中的扩散及传质情况有关，这是所谓色谱的动力学过程。

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HPLC柱效

1. 要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。

（1）降低移动相的流速,但会使分析时间延长。

（2）减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。

（3）减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。

（4）选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。

（5）适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。

（6）尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。

（7）离子交换柱长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生. 

（8）选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗.但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的. 如果柱子装反了,可以调回来,但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。

2、对柱效值进行跟踪测算应注意的问题

我们也应记住柱效值并不足以预测在所有条件下的柱性能，对大多数色谱工作者来说，柱性能指的是色谱柱用于特定分离的能力，而仅仅有高柱效并不能保证这种分离能力。

不管用什么特定的测试方法,都会有几个参数影响柱效的测定。这些参数包括：洗脱液的成分和粘度及其线流速，测定塔板数所用的溶质、温度、柱长、填料装填方式、颗粒度、还有所选用的测量和计算方法。而测量和计算方法对柱效值的确定起着极大的作用。

3、几种测量和计算柱效值的方法

因为色谱峰是假定样品浓度在移动相和固定相中呈正态分布而得到的样品谱带分布,故常常把色谱峰型看作正态曲线来计算理论塔板数。因此计算柱效（以理论塔板数n为单位）的公式习惯上定义为:

式中tR为色谱峰的保留时间；

σ2是以时间为单位测量色谱峰的偏差；

a是和峰高（从测峰宽的基线量起）有关的常数；

ωb是峰宽，表示由色谱峰顶点与色谱峰两侧拐点处做切线与峰底基线相交两点间的距离。

假如一个色谱峰真是正态峰型，那么每种计算方法都会得到同样的结果。然而即使一些比较理想的仪器和倾向于得到对称峰型的溶质,由于柱内的槽或空隙,也会出现非正态峰型。所以不同的计算方法将会得到相差较大的n值。通常偏离正态模型的峰型表示为“前延”或“拖尾”。对于这些峰型，越在峰的高处测量,计算的理论塔板数值就越大（准确性越低）。

在许多情况下,色谱工作者需要能反映整个峰型（包括拖尾）的柱效值，同时为了保证定量的重复性,也需要色谱峰很好的对称性。这时对色谱峰非对称性最敏感的计算方法最适合。如果目的仅仅是要监测色谱柱从第一次使用到使用寿命结束这一过程中的柱效，那么以上任何一种方法都可以，应选择最简便的方法。

Waters 液相色谱HPLC系列

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GC柱效

1、载气流速的选择 

气相色谱最常用的载气是：氢气、氮气、氩气、氦气。    

由速率理论可知，载气流速慢有利于传质，有利于组分的分离，但分析时间会加长；如果载气流速快有利于加快分析速度，减少分了扩散，但分离度降低。有时为了缩短分析时间，加大流量，但此时分离效果并不好。可见载气流速的快慢都会降低柱效。

2、进样技术的选择 

在气相色谱分析中，一般采用注射器或六通阀门进样。在考虑进样技术的时候，以注射器进样为主来研究。 

进样量：如果在进样过程中进样量大会导致：分离度小；保留值变化难于定性；峰高和峰面积与进样量不成线性关系，不能定量。进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关。进样量应控制在瞬间气化，达到规定分离要求和线性响应的允许范围内。

注射器里空气的排除：用微量注射器抽取液体样品,只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶,就可以将空气排除。还有一种更好的方法,那就是用计划注射量的约2倍的样品置换注射器3～5次,每次取到样品后,垂直拿起注射器,针尖朝上，留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部，推进注射器塞子,空气就会全部被排掉。 

保证进样量的准确：用经置换过的注射器取约计划进样量2倍左右的样品,垂直拿起注射器,针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样可用纱布吸收从针尖排出的液体。推进注射器塞子,直到读出所需要的数值。用纱布擦干针尖。至此准确的液体体积已经测得,需要再抽若于空气到注射器里。如果不慎推动柱塞,空气可以保护液体使之不被排走。 

进样手法：双手拿注射器。用一只手(通常是左手)扶针插入垫片,注射大体积样品(即气体样品)或柱前压力极高时,要防止从气相色谱仪注样器来的压力把注射器活塞弹出(即用右手的大拇指按压住活塞顶部)。让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口,压下注射器活塞停留1秒钟,然后尽可能快而稳地抽出针尖（抽出的同时继续压住注射器活塞)。

进样时间：进样时间长短对柱效率影响很大。若进样时间过长，遇使色谱区域加宽而降低柱效率。因此,对于冲洗法色谱而言，进样时间越短越好。 

3、气化室温度的选择  

气化室温度取决于样品的化学和热稳定性、沸程范围、进样口类型等。合适的气化室温度即能保持样品瞬间完全气化，又不引起样品分解。温度过低，气化速度比较慢，使峰形不规则，出现平头峰或伸舌峰；温度过高使出峰数目变化，产生前延峰，甚至样品分解。为选择合适的气化室温度，在多次的进样中我们发现，气化室温度比柱温高50-100℃或比样品组分中最高沸点高50-70℃较为合适。温度过高过低都会影响柱效。 

AGILENT 气相色谱仪GC系列

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