纯化工艺的又一“新选择 "——羟基磷灰石填料Ca++Pure-HA

羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）是目前最具有特征的混合模式填料之一，由于其结晶的化学结构、立体构造的特点，羟基磷灰石与抗体的Fab片段、Fc片段可发生相互作用。所以至今为止，羟基磷灰石在抗体及蛋白质的纯化、多聚体和残留核酸的去除等工艺中，作为精细纯化步骤的填料被广泛使用。并且，该填料兼具离子交换和金属亲和力，具有其他填料不具备的特殊分离能力，能够为生物大分子分离纯化提供独特的解决方案。

Ca⁺⁺Pure-HA羟基磷灰石填料由东曹公司采用了优质顶级材料，通过专有工艺研发生产的高纯度的10nm×100nm六边形截面晶体，凝聚成球状颗粒。经过高温烧结，提高了机械强度和化学稳定性，能够满足工业规模的纯化要求。Ca⁺⁺Pure-HA强大的特性使其可以在高流速和大型层析柱中重复循环使用。

上图显示的是，在装填有高吸附型羟基磷灰石Ca⁺⁺Pure-HA、市售高吸附型 (B公司Type I) 和高耐久型 (B公司Type II) 羟基磷灰石填料的层析柱中，连续用弱酸性蒸馏水通液时，层析柱的理论塔板数的变化情况。

市售品在大约80～90小时通液后，理论塔板数下降10%以上。与之相比，Ca⁺⁺Pure-HA的理论塔板数虽然也会缓慢减少，但在约160小时之前，理论塔板数仍保持在90%以上。也就是说，Ca⁺⁺Pure-HA属于高吸附型，且在酸性条件下的耐久性更好。

下图是使用Ca⁺⁺Pure-HA精纯IgG样品的分离实例。配合使用氯化钾洗脱缓冲液可以有效去除mAb中的聚集体和降解物。从分析结果中可以看到，单体峰和多聚体峰中间的分辨率较高。

随后，对纯化后的IgG样品进行尺寸排阻色谱分析。结果显示，单克隆抗体中多聚体的总量从18.8%降到了1.1%，显著降低。

从下图中可以看到，Ca⁺⁺Pure-HA在0.5 mol/L的NaOH溶液中具有良好的耐碱性，即使超过65个CIP循环后，动态吸附载量也没有明显降低。

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