Ä爱纯派 | 复合模式:填料中的变形金刚

2020-03-23 11:03:26, Liang & Wendy Cytiva(思拓凡)








是最长情的告白

陪伴

Ä
爱纯



GE小编

有话要说

首先祝所有长不大的小朋友儿童节快乐!小编今天用知识和大家过节~
实验室
小张
样品盐浓度太高,离子交换前是该稀释还是该换液?
大体积高电导样品有没有一种高效的方法能够直接上样捕获?
实验室
小李
实验室
小王
有没有更有效去除聚集体的层析方法?
分子筛流速慢上样还受限,有没有更好的解决方案?
实验室
小刘
GE小编

有话要说

面对这些问题,采用传统单一模式的层析方法无法解决时,就需要有新的解决方案----新型复合模式填料。

什么是复合模式填料?
复合模式,顾名思义,复合至少一种层析作用。目前复合模式,主要是复合两种层析作用。在工艺中,采用单一模式层析,有时即使再深入摸索工艺仍然无法达到要求。此时,复合模式填料则会产生出乎意料的效果且能够提供更广阔的操作空间。那么复合模式填料有哪些呢?


弱阳离子与疏水复合模式(Capto MMC)

强阴离子与疏水复合模式(Capto Adhere)

多模式基团与分子筛复合模式(Capto Core700)

Capto MMC

由于兼具离子交换和疏水两种作用力,Capto MMC在高电导情况下仍能保持理想的动态载量,尤其适合用在需高电导上样的样品,特别是大体积高电导样品的捕获。同时洗脱时也不再是传统的变电导洗脱.除了高电导上样的优势外, Capto MMC 对单抗领域中电荷差异较小的电荷异构体的分离作用明显.小粒径的Capto MMC ImpRes可用于要求高分辨率的杂质去除。应用特点如下:


高电导样品无需脱盐或稀释,直接上样

不再单一地改变电导进行洗脱,通过改变PH的策略进行洗脱,获得不同的分辨率及操作空间


Capto Adhere

Capto adhere及Capto Adhere ImpRes都为多模式强阴离子填料,高特异性的Adhere配基能一步将内毒素,DNA,聚集体,protein A,HCP去除,使得抗体纯化两步法平台工艺的实现成为可能。Capto Adhere ImpRes粒径更小,因此,其具有更高的分辨率。应用特点如下:


有效去除内毒素,DNA,聚集体,HCP,应用于抗体领域中度或精细纯化

在疫苗纯化中也有很多应用,可替代传统的冷苯酚沉淀工艺,减少废液处理成本,提高产品安全性,对操作人员的保护也更有保障

Capto Core700
 
新一代适用于大分子分离纯化的Capto Core 700 是粒径85 um 的高流速琼脂糖微球,具有5 um 孔径的惰性外壳,在微球里面带有对各种杂质有很强吸附能力的多模式基团。分子量大于700 KD 的物质都不能进入到微球内,被排阻,小分子被捕捉而被除去。Capto Core 700 对病毒不吸附,从而保护一些敏感的病毒的活性。具有分子筛和离子交换模式的优点,能高效的纯化病毒,可以有效的去除卵清蛋白、宿主蛋白和DNA片段。应用特点如下:


上样量更大(可达到分子筛的10倍)

流速更快(250-300cm/h)

柱高更低(20-40cm)


除病毒纯化外,IgM、PEG化蛋白及超螺旋质粒等大分子物质也可以使用Capto Core700进行分离纯化。

此外,除了上述的三种主要复合模式填料外,应用于基因治疗和DNA疫苗中的PlasmidSelect Xtra,由于其配基的特性,利用了嗜硫亲和与疏水作用原理,能特异性将开环的质粒(ocDNA)和超螺旋的质粒(scDNA)分开,从而使超螺旋DNA的纯度提高到95%以上。

如何快速摸索复合模式填料工艺

一提到复合模式填料的工艺开发,很多人都会避而远之,由于其作用复杂,所以层析行为不再是传统规律。有没有什么方法能够快速确定复合模式填料是否可行并优化出最优条件呢?使用HTPD方法进行初步结合条件及洗脱条件筛选使用柱层析,用DOE的方法进行层析条件的进一步优化,找到最佳操作空间。

 HTPD结合DoE,神马复合模式都不怕!

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不限,分离纯化相关,如蛋白层析、细胞培养液澄清、浓缩换液、层析柱装填、ÄKTA使用等。图文并茂者有加分
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