Ä爱纯派 | 病毒颗粒浓缩能好怎？

是最长情的告白

陪伴Ä爱纯派客户

小丸子

浓缩病毒时，膜包又堵了

膜包浓缩后毒价明显下降

客户小玉

实验室

花轮

HCP跟核酸又超标了

打完动物副反应很严重

实验室

杏子

相信从事疫苗行业的朋友对上述情境都深有体会。传统的病毒超滤浓缩通常使用100-300kD膜包，膜包筛网剪切力易造成病毒颗粒聚集和表面蛋白的脱落，从而影响病毒活性收率，因此对操作要求极高；此外，膜包筛网剪切力还容易加速杂蛋白的聚集（如牛血清白蛋白，卵清蛋白等），而100-300kD较小的膜包孔径不利于浓缩过程中杂蛋白透过，因此浓缩液杂蛋白含量在浓缩过程中不断增加，蛋白凝胶层显著影响浓缩处理速度，较高的黏度也不利于后期4FF分离纯化和填料寿命。

中空纤维膜开放式流道解决了病毒颗粒浓缩时易堵膜和对剪切力敏感易聚集两大技术难题，提供了较温和的超滤方法以有效保护病毒颗粒的完整性，因此广泛应用于疫苗等生物制药和生命科学研究领域。

选择GE中空纤维的五大理由

孔径均一

GE中空纤维膜具有均一的孔径分布，有效截留病毒，无抗原漏出风险

可选择较大孔径

较大孔径使得DNA和杂蛋白等杂质能够透过，降低浓缩后料液粘度，减少下游层析的压力

温和低剪切

开放式通道能够避免病毒颗粒聚集和表面蛋白的脱落，提高产品质量和活性收率

无清洗死角

直流道的中空纤维不存在任何清洗死角，能够保证每次CIP的有效性

可线性放大

GE拥有全线中空纤维产品，能够满足从小试到生产规模的需求

中空纤维在疫苗行业的应用

Bernd Kalbfuss 等人将750kD中空纤维膜用于MDCK细胞流感病毒培养液的浓缩，发现中空纤维750kD超滤膜可以有效去除宿主DNA等杂质。吕洪亮等在2009年成功的使用750kD中空纤维进行兽用狂犬疫苗的浓缩，研究结果表明：相比100kD和500kD的超滤膜，750kD中空纤维膜可以充分截留狂犬病毒，实现高抗原收率，同时有效去除牛血清白蛋白，提高疫苗的安全性、有效性和稳定性。最终成功建立了Cytodex 1微载体细胞培养、中空纤维750kD浓缩、Sepharose 6FF层析纯化的高质量兽用狂犬疫苗生产新工艺。

相对于其他杂蛋白和DNA等杂质，病毒颗粒具有较大的分子量，因而可以使用超滤膜过滤和分子筛等技术按照分子量大小进行分离分级，建立通用的病毒纯化工艺。病毒类疫苗通常使用微载体细胞培养技术进行病毒培养，一定滴度的病毒培养收获液可通过0.45μm的中空纤维澄清过滤去除细胞碎片和部分DNA，超滤膜浓缩10-80倍，经灭活水解之后使用Sepharose 4FF或6FF分子筛层析按照分子量大小进行精细纯化。

使用750kD中空纤维和300kD膜包浓缩过程的通量-透过体积曲线见下图。使用中空纤维750kD超滤柱进行狂犬病毒培养液浓缩，浓缩20倍然后滤洗3倍，整个过程需要1小时16分，平均处理通量61 L/m2/hr (LMH)。使用300kD膜包进行浓缩，浓缩20倍然后滤洗3倍，平均处理通量49 LMH。

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