色谱柱的使用（一）HILIC模式色谱柱的原理与维护

C18色谱柱能够满足分析行业的绝大部分应用，但是有些极性药物在反相的保留并不十分理想，因此大家会使用到HILIC模式色谱柱。

沃特世HILIC模式色谱柱主要包括以下三个系列：

♢XBridge BEH HILIC/BEH Amide(1.7 μm,2.5 μm,3.5 μm,5 μm)

♢CORTECS HILIC(1.6 μm,2.7 μm)

♢Atlantis HILIC(3 μm)

本期文章小编就给大家介绍一下HILIC模式色谱柱的原理与维护。

保留机理

HILIC模式色谱柱综合了液液分配、离子交换和氢键作用：

◐ 极性分子首先在主体流动相与色谱填料表面的半固定的高极性水膜之间发生液液分配

◐ 次级保留作用包括色谱填料表面硅醇基和/或极性官能团与带电分析物发生的离子交换作用

◐ 氢键作用发生在带正电的分析物与带负电的表面硅醇基之间

HILIC填料内孔示意图

流动相选择/梯度设置

流动相选择/梯度设置请从高有机相起始。

流动相洗脱强度示意图

使用要点

1

流动相添加剂：

不推荐使用磷酸盐

2

溶样溶剂：

与反相色谱溶样溶剂不同，通用推荐为75:25 乙腈:甲醇

3

色谱柱的平衡、清洗与保存:

◐系统清洗溶剂

► 针強洗：1:9 乙腈:水

► 针弱洗/purge 溶液：初始流动相条件（不包括盐、添加剂、缓冲液）

◐新色谱柱活化

► 用50倍柱体积的50/50乙腈/水平衡（含有10 mM缓冲盐或者0.2%的添加剂）

◐色谱柱的平衡

► 初始流动相平衡20倍的柱体积

◐梯度分离

► 再平衡5-8倍柱体积流动相

◐色谱柱的保存 

► BEH Amide 保存在100%乙腈

► BEH HILIC 保存在95%乙腈水

后续还有更多关于色谱柱使用与维护的精彩文章，敬请期待。