玉米中黄曲霉毒素B族的检测

前言

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。

黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

关键词

SPE 1000；粮谷；黄曲霉毒素；GB 5009.22-2016

1仪器设备及试剂

1.1仪器设备

SPE 1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科公司；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；

黄曲霉毒素免疫亲和柱（月旭 1mL）

1.2试剂

甲醇，乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；

超纯水；

黄曲霉毒素B族标准储备液：黄曲霉毒素B1和B2（10ug/mL），甲醇；

黄曲霉毒素B族标准工作液：取10μL的标准储备液于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为10ng/mL的标准工作液。

2实验过程

2.1样品预处理

       称取5g玉米试样(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，涡旋混匀，用均质器10000r/min上下震荡均质3 min，在6000r/min下离心20min。准确移取4mL上述上清液，加入10mL超纯水，混匀，待净化。

2.2加标样品

在2.1的待净化液中加入50μL的10ng/mL黄曲霉毒素标准工作液，样品的加标浓度为0.5ng/g。

2.3 SPE净化

        按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，加载并运行方法，SPE1000进行2.1或2.2中样品的SPE萃取过程。

        收集样品到收集瓶中，用超纯水定容到1.0mL，用0.22μm滤膜过滤，待检测。

图1 黄曲霉毒素净化的固相萃取方法

2.4高效液相色谱-荧光检测条件

色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：超纯水：甲醇+乙腈（50+50）=68:32；

流速：1.0mL/min；

柱后衍生：光衍生；

荧光检测器：激发波长360nm，发射波长440nm；

柱温：40℃；

进样量：20μL。

3实验结果

3.1黄曲霉毒素B族标样液相色谱图

图2为0.5ng/mL的黄曲霉毒素B族标样的液相色谱图。

图2 0.5ng/mL的黄曲霉毒素B族标样液相色谱图

3.2空白样品色谱图

图3为空白样品的色谱图，在黄曲霉毒素B1和B2的出峰时间处没有峰，说明该样品中没有黄曲霉毒素B1和B2检出。

图3 空白样品色谱图

3.3加标样品色谱图

图4为加标样品的色谱图。

图4 加标样品色谱图

3.4加标回收率结果

        表1为加标回收率结果，4个平行样黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD分别为2.7%和2.2%。

表1加标回收率结果

4结果与讨论

本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的食品中黄曲霉毒素B1和B2检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B1和B2的固相萃取，并用液相荧光检测器进行检测，方法的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

参考标准

1、GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定