2019-02-13 15:12:34 SCIEX
胶类药材是具有典型民族特色的传统中药,是由动物皮、甲、角等为原料,加工而成的明胶类物质,常见的有阿胶、龟甲胶、鹿角胶。近年来,由于动物胶类药材的生产原料短缺,价格昂贵,一些不法企业为降低成本,就开始用下脚料甚至不明来源的皮革制胶,同时在高价胶类药材(龟甲胶及鹿角胶)生产过程中掺入低价胶类(阿胶或明胶)的情况屡见不鲜,导致胶类药材的质量参差不齐、市场比较混乱。
为了保障人民用药安全有效、保护消费者利益,由国家食品药品监督管理部门批准颁布实施的2015 年版《中国药典》中,明确规定了高灵敏度、高特异性的液相色谱- 质谱联用方法进行阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别。同时,2014 年国家食品药品监督管理局药品补充检验方法中明确规定了龟甲胶和鹿角胶要检查牛皮源成分和驴皮源成分的限量,早在2012 年就颁布了“阿胶中牛皮源含量的补充检验方法”,明确规定了阿胶样品中牛皮源特征肽A 含量不得超过0.3 μg/ml。
本实验参照2015 年版《中国药典》中规定的胶类检测方法,使用胰蛋白酶对胶类药材进行酶解,利用高效液相色谱- 三重四极杆质谱联用仪,通过多反应监测(MRM)方法,对阿胶、龟甲胶、鹿角胶药材专属的特征成分进行了检测。
并将上述胶类以及牛皮源特征肽A的特异性离子对整合到一个液质联用方法中。实现了一个方法能检测药典中规定的各种胶类。在不影响分离效果的前提下,采用较快速的液相洗脱梯度,节省了仪器分析时间。
实验仪器与材料
SCIEX API 3200 三重四极杆质谱仪。
阿胶(批号:121274-201202)、龟甲胶(批号:121693-201301)、鹿角胶(批号:121694-201301)、黄明胶(批号:121695-201301)对照药材以及牛皮源特征肽A 标准品(11941-201202 均由中国食品药品检定研究所提供。分析用样品由湖北康源药业有限公司提供。
实验方法和条件
液相条件
色谱柱:C18,2.1×150 mm,3 μm ;
流动相:A:0.1% 甲酸水溶液,B:乙腈;
流速:0.3 ml/min ;梯度洗脱条件见表1 ;
柱温:40℃ ;进样量:5 μl。
质谱条件
ESI+ 正离子模式;气帘气CUR :20 psi ;碰撞气CAD :6 ;雾化气GAS1 :60 psi ;辅助气GAS2 :50 psi ;IS 电压:5500 V ;源温度:600 ℃ ;扫描方式:MRM,相应的离子对信息及相应的参数见表2。
表1. 梯度洗脱条件
表2. MRM 离子对及相应的参数
对照药材溶液、以及样品的制备
分别取阿胶、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶对照药材和相应的样品各0.1g,按照《中国药典》2015 年版中鉴别项下的方法,以及由国家食品药品监督管理部门批准颁布胶类药材补充检验方法中的样品制备方法,进行提取和酶切。制备对照药材溶液和样品溶液。
实验结果与讨论
通过上述液相色谱- 质谱联用方法,一次进样,同时检测8 个MRM 离子对,对各样品分别进样分析,结果表明:阿胶、鹿角胶、龟甲胶各化合物检测离子对MRM 色谱峰的信噪比(峰峰比)远高于2015 版《中国药典》中规定的信噪比3:1,牛皮源特征肽A 以及黄明胶对照药材中的成分,信噪比均大于10:1和3:1,完全满足检测要求。代表性的色谱图见图1 和图2。
分别对阿胶、鹿角胶、龟甲胶样品进行了测试,在阿胶样品中检测到阿胶特征成分,而没有检测到牛皮源特征肽A,鹿角胶中也分别测得相应的特征性成分,而没有检测到牛皮源成分和驴皮源成分,产品质量符合规定。代表性色谱图见图3 和图4。
小结
本实验室采用API 3200 液质联用系统,针对2015 年版《中国药典》中规定的阿胶、鹿角胶、龟甲胶三种药材的定性鉴别试验进行了方法的建立和测试。药典中液相梯度洗脱时间采用40 min,而本实验仅用20 min 就完成了测试,大大节省分析时间的同时,也提高了检测通量。
采用本文方法得到的信噪比远高于药典中规定的胶类药材检测的信噪比,同时也建立了阿胶中牛皮源含量测定,以及龟甲胶、鹿角胶中牛皮源成分和驴皮源成分测定的方法,满足国家食品药品监督管理局2012 年、2014 年颁发的补充检验方法的规定。为阿胶、龟甲胶、鹿角胶的质量控制提供给了科学、准确的试验数据和依据。
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