同样是VB12，为什么供应商A和B颜色不同？

为了进一步标准化细胞培养基及其相关原材料的颜色评估，我们采用色差仪（colorimeter）对粉末产品进行更为客观的评价。该方法使用稳定的光源和分光光度计，从光学吸收、反射及透射的角度对细胞培养基粉末和原材料的颜色进行定量表征。色差仪可输出光谱数据及对应的颜色参数，包括红–绿轴（a*）、黄–蓝轴（b*）和明暗轴（L*）。

在本研究中，我们对来自不同供应商、且具有不同粒径分布的维生素B12原料进行了颜色测定。基于这些颜色数据，建立了一个用于评估维生素B12原料对细胞培养基产品外观影响的模型。该模型通过使用不同来源维生素B12制备的培养基产品以及目视观察结果进行了验证，为评估原材料对细胞培养基外观的影响提供了分析框架。

在Cytiva的标准原材料来料质量控制（QC）过程中，原材料的目视检查是一项常规要求。除目视检查外，还可利用光谱色差仪对原材料及细胞培养基产品的颜色特性进行分析。色差仪可对样品进行光谱扫描，并输出样品在CIE色彩空间中的颜色参数（见图1）。

图1. 用于原材料及细胞培养基产品颜色测定的CIE色彩空间

如图2所示，来自两个不同供应商（供应商A与供应商B）的维生素B12原料在外观颜色上存在明显差异。对这两种原料进行色差仪测定后，光谱数据证实，与供应商A的维生素B12相比，供应商B的维生素B12表现出明显的红移现象（图3）。

图2. 供应商A和供应商B来源的维生素B12原料颜色差异的目视观察

图3. 供应商A与供应商B来源的维生素B12原料的光谱图

作为原材料风险评估的一部分，我们对这两种维生素B12原料进行了深入研究，以确定导致其颜色差异的物理和化学因素。

对来自供应商A和供应商B的多批次维生素B12原料进行了分析测试，包括紫外/可见光谱分析（UV/Vis，图4）、质子核磁共振（¹HNMR，图5）以及傅里叶变换红外光谱（FTIR，图6），以确定原材料的化学特性。

图4. 各供应商来源的维生素B12原料的紫外/可见光（UV/Vis）光谱（左），以及相应的测试结果与USP要求（右）。来自供应商A和供应商B的维生素B12原料均符合USP的全部要求。

图5. 供应商A与供应商B来源的维生素B12原料的叠加¹H‑NMR谱图。两者的¹H‑NMR谱峰高度一致，表明两种原料的化学结构相同。

图6. 供应商A与供应商B来源的维生素B12原料的叠加FTIR光谱。供应商A不同批次原料与供应商B参考光谱的相关性分别为98.2%、98.08%和98.39%。

图7. 供应商A与供应商B来源的维生素B12晶体的显微镜图像

图8. 供应商A与供应商B来源的维生素B12原料的粒径分布

图9. 基于维生素B12粒径与浓度的简化细胞培养基产品外观颜色的最小二乘拟合模型及其表面响应图。各表面响应图中的颜色分布基于CIE色彩参数（L*、a*、b*）。

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1. USP, <631>, color and achromicity, 2023; https://doi.org/10.31003/USPNF_M99390_03_01

2. European Pharmacopoeia 11.3, 2.2.2 Degree of coloration of liquids. 2021