ICON™ 高通量单克隆表征分析仪——克隆选择的革新之旅！

众所周知，细胞株开发（CLD）工艺流程从单细胞的分离，到单克隆源性确证，再到克隆表征，直至最后选出最优克隆，都存在很多挑战。例如：

对于单细胞分离，自动的单细胞分离技术例如柔性铺板、柔性流式，微流控结合光导技术等，都显著提高了单细胞的分离效率。对于单克隆源性的验证，目前以影像学技术为主，可以满足 IND 申报需求。

那么在克隆表征方面，以克隆滴度（Titer）、细胞活率（VCD）结合糖基化快速测定为一体的产品还鲜有开发。ICON 将 Titer 和 VCD 及糖基化测定功能结合在一起，相较于传统方法样本用量大，检测步骤繁琐，检测时间长等缺点，ICON 检测方法具有低样本量、样本处理简单以及测定速度快等优点，大大加快克隆筛选速度。与此同时，智能软件 STUDIUS^®，兼具操作，数据管理分析，符合 GMP 要求等特点。与 VIPS PRO、CMX 连用，STUDIUS^® 可将数据综合处理，例如可根据单克隆性、汇合度、产率、糖基化程度等自动将克隆排序，无需人工导出 excel 表格，减少操作引入的错误风险。

图 1：克隆选择的革新之旅

ICON 能够追踪单克隆生长、进行单克隆源性验证，还能够进行活细胞计数、蛋白滴度及关键质量属性 (CQA) 的测定。结合 STUDIUS 智能软件平台，生成准确的克隆排序参数（如标准化滴度（Normolized Titer）和特定产率（QP）），自动对克隆排序，从而筛选出目标克隆，即时且无误。

根据用户的实际需求，ICON 可以选择添加整孔成像模块，高质量的多层成像功能助力单克隆源性证据获取，自动生成的单克隆报告记录申报所需关键信息，助力申报流程。

图 2：ICON 整孔图像（图左），DAY0 单细胞清晰可见（图中）。单克隆报告（图右）

该功能基于荧光偏振（FP）技术，具有快速、灵敏度高、特异性好、易操作、省时的特点。ICON 的 Titer 检测十分便捷，只需加样、混合、读数，整个操作时间＜10 min（96 孔板），简单、快速、准确。

图 3：STUDIUS 操作界面，可视化 Titer 值一目了然

ICON™ VCD 检测基于台盼蓝以及自动成像技术，样品用量只需 20μL，可在细胞培养早期进行测定。并且只需 4 分钟，即可轻松检测 24 个样品。

此外，ICON™ 与当下常规细胞计数仪进行测量结果的准确性的比较，通过平均精度均值（mAP）、线性回归方程相关系数（R2）和变异系数（%CV）三方的对比，发现 ICON 的准确度更高。

众所周知，糖基化对于抗体的药代动力学、效应功能和安全性至关重要。常用检测方法如（U）HPLC、HILIC、MS、LC-MS 等。但样品前期处理以及送检周期长。ICON 糖基化检测可以快速测定含有 Fc 端 IgG 的糖基化情况，加速克隆筛选流程。样本体积只需 10μL 细胞培养上清液即可在约 2h 左右得出糖基化相对值。可测定糖型包括半乳糖、甘露糖、岩藻糖、唾液酸（3 类）共 6 类常见糖基化类型。

该糖基化快速测定技术基于三明治免疫分析法，经过特殊设计的 384 孔板板底具有金字塔形状的向上凸起结构，板底铺有可以结合 IgG Fc 端的微珠，依次加入样本，荧光标记的凝集素（不同凝集素识别不同多糖）共孵育后，如果 IgG 含有与凝集素对应的糖基，便会形成会微珠、IgG、凝集素三者的聚合体。充分沉淀后，捕获孔上层区域的游离凝集素的荧光信号，拟合出糖基化的相对数值。

图 5：糖基化测定 384 孔板的设计及操作流程。将荧光标记的凝集素和预处理的样本加入孔中，在摇床中孵育 45 分钟。然后将板离心，使微珠迅速沉降至孔底部。最后，通过荧光测量未结合的凝集素量，拟合出糖基化相对数值。

该方法为糖基半定量方法，使用凝集素结合率体现糖基相对含量，经验证，该方法与传统方法 UHPLC，MS，HILIC 相关性良好。