瑞孚迪AlphaPlex双因子检测:高效、灵敏的细胞因子分析平台

2026-05-11 09:41:57, Lu.B 上海玮驰仪器有限公司


在生命科学研究和药物开发中,细胞因子参与了许多病理过程,是免疫学、炎症研究、肿瘤微环境分析等领域的重要检测指标。然而,传统的免疫测定方法虽然经典,但往往面临耗时、样本需求量大、检测范围窄、单因子检测等挑战。瑞孚迪(Revvity)推出的AlphaPlex技术能够在同一样本中对两种不同的细胞因子进行分析,是一种高效、灵敏、均相的免疫检测平台。




检测原理



以IL-6和IL-8的检测为例 (图1):生物素化的抗分析物抗体与涂有链霉亲和素的Alpha供体磁珠 (Donor beads) 结合;而其他抗分析物抗体则分别与AlphaLISA(IL-8)或AlphaPlex 545 (IL-6)  受体磁珠 (Acceptor beads) 结合。在分析物存在的情况下,这些磁珠会相互靠近。这种接近会引发一系列反应:供体磁珠在680 nm激光激发下,将周围的氧气转化为单线态氧分子;随后,单线态氧分子触发受体磁珠中的能量传递级联反应,在AlphaLISA磁珠上产生615 nm的发射光,在AlphaPlex 545磁珠上产生545 nm的发射光,信号与待检物成正比。

图1   AlphaPlex IL-6/IL-8检测原理




数据展示



图2  HT-29(左)和 HELA(右)细胞培养条件中IL-6 和 IL-8 的标准曲线

我们研究了HT-29和HeLa细胞中IL-6和IL-8的差异调节作用。针对HT-29(图2左)和HeLa(图2右)细胞系,分别绘制了两种细胞因子的独立标准曲线,以确保基质的均匀性。对这两种细胞系进行饥饿处理后,用5 ng/mL的IL-1β刺激24小时。

数据表明,HT-29细胞即使数量很少也能产生大量的IL-8,但未检测到IL-6的含量 (表1)。HeLa细胞能够高水平产生这两种细胞因子,即使在每孔625个细胞的情况下,也能检测到其含量 (表2)。IL-6/IL-8双因子检测法识别了两种不同细胞系产生的特定细胞因子,显示出IL-6在HT-29 (无法测出) 和HeLa (纳摩尔级) 之间分泌模式的显著差异。




总结



本文展示了利用AlphaLISA和AlphaPlex 545磁珠构建的双因子免疫检测方法在不同细胞系中的验证数据。该方法使实验更具效率:每孔可同时检测两组分析物,在实现定量分析的同时显著节省时间和成本。通过这一检测方法,我们能够在单个孔中为两种目标细胞因子建立高灵敏度、宽动态范围和高特异性的标准曲线,同时保留了Alpha技术在复杂基质中的抗干扰能力,使其可应用于细胞上清、血清血浆等动物样本 (参考推文)。 这些特性使AlphaPlex技术成为一种适用于测量复杂生物体系中双因子的有效检测手段。


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