2026-03-05 13:40:16, ZHU HE Cytiva(思拓凡)
在蛋白纯化、分离制备实验里,ÄKTA层析系统是公认的稳定可靠、精准高效,堪称实验室核心装备。
但很多人忽略一个真相:层析好不好,关键看准备。缓冲液、排气、装柱、管路…… 一步错,峰形变、回收率低、结果不重复,后面全“白忙”。
「手把手带你做实验」第一期,我们将把ÄKTA实验前全套准备一次性讲透,从开机到连接层析柱,step by step,新手也能零失误上手。
一、缓冲液&样品:
先过滤再脱气,基础不能省
所有层析用的缓冲液及样品都需要用0.22 µm或0.45 µm的滤膜过滤,并对缓冲液进行脱气处理(如超声波脱气或者负压脱气)。
这一步直接决定:有没有气泡、基线稳不稳、压力会不会乱跳。
二、开机顺序别搞反:
先开设备,后开软件
1
先打开ÄKTA主机电源,等待主机呼吸灯白灯常亮或显示屏显示Ready
2
双击启动UNICORN软件,输入密码(无密码直接登录)
3
打开System Control窗口(可从其他界面Tools进入),系统自动连接
4
也可手动点击System→Connect to Systems…,选中对应系统→勾选Control→OK,界面左下角Status显示Ready,手动连接成功
图1 设备与系统连接
三、系统排气泡:
管路有气泡,层析柱易“损伤”!
ÄKTA常用两种排气方式:
1
自动泵洗(Pump wash)
把A1、B1等缓冲液管路放入去离子水
进入Manual→Execute Manual Instructions
选择Pumps→选择入口管路,Pump A wash / Pump B wash
选好入口Insert后,点Execute自动冲洗
图2 Pump wash界面
⚠️在系统进行Pump wash命令时需观察入口管道中是否有气泡、如有气泡是否再向前移动,或观察W1出口是否有液体流出。如发现管道中有较长段气泡无法排除或W1出口无液体流出,需要在Pump wash结束后对相应的入口进行泵头手动排气。
2
泵头手动排气(气泡顽固时用)
在泵头旋钮处接注射器
逆时针拧松旋转四分之三圈→缓慢抽气
看到管路完全充满液体无气泡即可停止
图3 手动排气
⚠️ 小提醒:
A泵两个泵头都要依次排气,B泵、S泵同理
想对A2/B2管路进行排气,需先在Flow Path里切换入口
四、连接层析柱:
压力+流向+安装柱子一步到位
层析柱装不好,极易引起压力报警、漏液、峰形变差等问题。
1
先设压力报警
Manual→Execute Manual Instructions→Alarms
设置柱前压力&柱压差(按说明书填写或Column handling界面(如下图)查询,如0.5 MPa)
如无Alarm delta column pressure,则无需设置
图4 设置柱前压力报警
2
设置柱位&流向
有柱位阀:Flow Path→Column position(选择柱位)→Flow Direction复选框中选择流向一般选Down flow
如无柱位阀,无需设置
图5 设置柱位和流向
3
设流速并运行
Pumps→System flow设合适的流速(如0.3 mL/min)→Execute
4
正式接柱
液流稳定:在选定的柱位的A位置(如选择3号柱位则3A位置)连接PEEK管,等液体稳定流出
连接上柱头:PEEK管液液相接层析柱头上端,先不拧紧
拧紧上柱头接头:拧松层析柱下端堵头,将上柱头与连接管出口相连拧紧
连接下柱头:打开柱下端,连接在柱位阀3B接口上的管线相连或直接连接在柱位阀的3B接口上
固定层析柱:拧紧接头,确认不漏液后,用柱夹固定层析柱
如无柱位阀,将上样阀Col出口的管线按照前面描述的方式连接层析柱上端,紫外检测器连接的管线连接层析柱下端
层析柱连接后检查上下端均无液体溢出层析柱已经连接成功,使用柱夹固定层析柱即可
图6 柱位阀管线连接
5
收集器准备:收尾一步,准备完成
在收集器托盘按顺序放好收集管
点击软件停止按钮(如下图),结束当前运行
整套ÄKTA层析前准备工作完成
总结一句
ÄKTA想要做得顺,准备一定要做足。过滤脱气、正确开机、彻底排气、规范连接柱子,每一步都是实验成功的关键!
详细操作可见下方《ÄKTA系列超全应用培训手册》和层析柱使用前准备视频。
相关阅读:
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《ÄKTA系列超全应用培训手册》
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