Altura 超高惰性色谱柱赋能生物分子质谱分析新高度

2025-11-18 17:05:41, 安捷伦科技安捷伦科技（中国）有限公司

在分析科学中，实现生物分子的可靠色谱分离一直是一项挑战。科学家通常采用亲水相互作用色谱 (HILIC) 检测和分离酸性代谢物（例如含有多个磷酸或羧酸基团的代谢物）。在分析磷酸肽、磷酸化多糖、单克隆抗体和药物化合时，各种固定相（包括反相、离子交换和体积排阻）普遍存在信号抑制与峰形不佳的情况。这些现象通常与色谱柱及系统硬件金属表面的相互作用有关。

超高惰性技术的 Agilent Altura HPLC 柱是一款带涂层的不锈钢 (SS) 柱，其惰性涂层可阻止分析物与金属表面的相互作用，同时仍保持了不锈钢柱硬件的强度、稳定及耐高压优势。

实验部分

样品

极性代谢物包括有机酸（即谷氨酰胺、谷氨酸和苹果酸）

和磷酸化核苷酸（例如 AMP、ADP 和 ATP）

磷酸肽样品（序列信息及磷酸化残基位点详见表 1

表 1. 本研究中使用的磷酸肽的序列。(pS) 表示磷酸化丝氨酸，(pY) 表示磷酸化酪氨酸

标识符	序列
a	SFVLNPTNIGM(pS)KSSQGHVTK
b	FQ(pS)EEQQQTEDELQDK
c	TRDIYETD(pY)YRK
d	TRDI(pY)ETD(pY)(pY)RK

仪器和色谱柱：

色谱柱：

采用超高惰性技术的 Agilent Altura HILIC-Z 色谱柱， 2.1 × 150 mm, 2.7 µm （部件号 227215-924）

仪器和参数：

LC/MS 分析采用以下仪器配置：

Agilent 1290 Infinity II 生物高速泵 (G7132A)

Agilent 1290 Infinity II Bio Multisampler，配备样品恒温箱 (G7137A)

Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱 (G7116B)

Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF

表 2. HPLC 参数

Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统
流动相 A	0.1% 甲酸水溶液
流动相 B	含 0.1% 甲酸的乙腈溶液
柱温	40 °C
流速	0.4 mL/min
进样器温度	8 °C

表 3. 质谱参数

Agilent 6545 XT AdvanceBio LC/Q-TOF
离子源	安捷伦双喷射流 ESI 离子源
极性	正
气体温度	325 °C
干燥气流量	8 L/min
雾化器	35 psi
鞘气温度	275 °C
鞘气流量	11 L/min
毛细管电压	3500 V
喷嘴电压	0 V
碎裂电压	175 V
锥孔电压	65 V
参比质量	322.0481，922.0098
MS1 范围	m/z 300-1250
采集速率	1 幅谱图/秒

实验结果与讨论

采用超高惰性技术的 Altura 色谱柱在三类代表性化合物的分析中始终优于不锈钢色谱柱。

Altura 色谱柱具有优异惰性，可明显减少分析物因为吸附造成的信号损失。

图 1. 不锈钢 (SS) 和 Agilent Altura 超高惰性 HPLC 色谱柱在三类化合物中的色谱性能比较：合成肽、磷酸化核苷酸（AMP、ADP 和 ATP）和酸性代谢物（谷氨酰胺、谷氨酸和苹果酸）。合成肽采用反相 (RP) 色谱分离，磷酸化核苷酸和酸性代谢物则采用亲水相互作用色谱 (HILIC) 分离。

图 2. 通过柱状图显示，Altura 色谱柱的相对信号强度明显更高，证明了出色的惰性和更高的分析物回收率

表 4. 采用惰性色谱柱硬件改善峰形。结果表明，金属敏感性分析物的拖尾因子得到明显改善。部分分析物因完全吸附无法获得定量结果，未列入本表。多肽 “a” 和多肽 “c” 的序列参见表 1

	拖尾因子(TF)
	肽段		代谢物
	a	c	谷氨酰胺	谷氨酸	AMP	ADP
不锈钢	1.2	1.9	1.8	1.4	2.6	4.8
惰性	1.0	1.4	1.2	1.3	1.3	1.7
△ATF (惰性-不锈钢)	-0.2	-0.5	-0.6	-0.1	-1.3	-3.1

结语

在所有测试的化合物类型中，采用超高惰性技术的 Altura 色谱柱产生的信号强度是传统不锈钢柱的 2 至 3 倍。此外，使用惰性柱硬件时拖尾因子降低，表明大多数目标分析物的峰分离度得到显著提高（表 4）。这些结果证明了硬件表面的化学性质在实现可靠、高灵敏度分离方面的关键作用，对于容易与金属发生相互作用的分析物更是如此。