我拿什么分析你，大分子样品！

（图片来源：包图网）

分子的体积排阻，样品组分和固定相之间原则上不存在相互作用，色谱柱的固定相是具有不同孔径的多孔凝胶，在固定相确定的分子量范围内，洗脱顺序按照分子大小分布。当样品分子量较大，以至于被完全排除在固定相微孔之外时（全排阻），其保留体积等于色谱柱内微粒间的空隙体积；而分子量足够小的分子可以完全进入微孔中，其保留体积为空隙体积和固定相中微孔体积之和，因此小的溶质分子保留时间长，洗脱体积大，而大的溶质分子保留时间短，洗脱体积小。固定相的分子量测定范围即为全渗透和全排阻之间的分子量范围。

理想的体积排阻色谱固定相应具有窄的孔径分布范围，而系列色谱固定相应具有宽范围的孔径分布，可根据样品的不同选择不同分子量范围的SEC柱，也可将不同规格的SEC柱串联使用，用于分离更大分子量范围的样品。

一般用于分离水溶性的大分子，凝胶的代表是葡聚糖系列，洗脱溶剂主要是水。

主要用于有机溶剂中可溶的高聚物相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。

两种方法的分离原理虽然相同但采用的固定相、分离对象和使用技术完全不同。

体积排阻色谱法中，实际的分离效果与样品、流动相之间的相互作用无关，因此改变流动相的组成一般不会改变分离度。当采用示差折光检测器时，为提高检测灵敏度，应使流动相的折射率与被测样品的折射率有尽可能大的差别。若使用紫外吸收检测器，也应采用在检测波长无紫外吸收的溶剂。

体积排阻色谱法中流动相的选择原则：

凝胶渗透色谱主要用于高聚物分子量的测定。四氢呋喃对此类样品有良好的溶解性能，可使小孔径聚苯乙烯凝胶溶胀，因此被广泛使用作为GPC流动相。但因其在储运过程中特别是在光照射条件下，容易生成过氧化物，使用前必须除去。二甲基甲酰胺、邻二氯苯、间甲酚等溶剂可在高柱温条件下使用；强极性的六氟异丙醇、三氟乙醇等可用于粒度小于10μm的凝胶柱。

在凝胶过滤色谱中，通常以具有不同pH值的缓冲溶液作为流动相。当采用亲水性有机凝胶（葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等）、硅胶或改性硅胶为固定相时，固定相与样品间可能存在多种相互作用影响GFC测定准确性，可在流动相中添加少量无机盐以保持一定的离子强度（0.1~0.5mol/L），其中钠、钾、铵等的硫酸盐、磷酸盐消除吸附作用的效果较好。当使用硅胶基质凝胶时，流动相的pH值应保持在4~8的范围，以免硅胶键合相被破坏。

该冲洗的清洗溶液选择的基本原则：

作者：袁凯旭

排版：蔡根花

审核：夏微微