动物源食品中多种激素残留测定的前处理方法

2020-07-20 12:10:29, 坛墨质检坛墨质检科技股份有限公司

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残留于畜禽、水产品的技工脂肪、肝、肾、奶制品、蛋类的性激素通过食物链被人体摄入后, 对人体固有激素系统的正常工作构成严重干扰, 尤其对胎儿、儿童的生殖系统、神经系统、免疫系统的正常发育威胁极大。为防止高性激素残留的食品被人食用, 危害身体健康, 必须对食品中性激素残留进行检测和分析。要有效地分析出动物源食品中残留的性激素, 除了有比较灵敏的检测仪器和科学的检测技术, 样品前处理必不可少且非常重要。
本章阐述了如何将性激素从样品的基质中分离出来并将待测物转成为仪器可以检测的形式的过程，以提取、净化、浓缩、衍生等为重点，说明了相关注意事项，旨为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测对象

动物源食品中激素残留

检测项目

去甲雄烯二酮、群勃龙、勃地酮、氟甲睾酮、诺龙、雄烯二酮、睾酮、普拉雄酮、甲睾酮、异睾酮、表雄酮、康力龙、17β- 羟基雄烷-3-酮、美睾酮、达那唑、美雄诺龙、羟甲雄烯二酮、美雄醇、雌二醇、雌三醇、雌酮、炔雌醇、己烷雌酚、己烯雌酚、己二烯雌酚、炔诺酮、21α-羟基孕酮、17α-羟基孕酮、左炔诺孕酮、甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、乙酸氯地孕酮、曲安西龙、醛固酮、泼尼松、可的松、氢化可的松、泼尼松龙、氟米松、地塞米松、乙酸氟氢可的松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、曲安奈德、氟轻松、氟米龙、布地奈德、丙酸氯倍他索

应用范围

食品/动物源性食品/猪肉、猪肝、鸡蛋、牛奶、牛肉、鸡肉和虾

方法原理

试样中的目标化合物经均质，酶解，用甲醇-水溶液提取，经固相萃取富集净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

前处理仪器

分析天平：感量 0.0001 g；天平：感量 0.01 g；组织匀浆机；涡旋混合器；恒温振荡器；超声清洗仪；离心机：10000 r/min；固相萃取装置；氮吹仪；pH 计。

检测仪器

LC-MS

试样制备

1. 动物肌肉、肝脏、虾

从所取全部样品中取出有代表性样品约 500 g，剔除筋膜，虾去除头和壳。用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

2. 牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约 500 g,充分摇匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 0 ℃〜4 ℃以下冷藏存放。

3.鸡蛋

从所取全部样品中取出有代表性样品约 500 g，去壳后用组织捣碎机充分搅拌均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密

封，并标明标记，于 0 ℃〜4 ℃以下冷藏存放。

前处理方法

1.提取：

称取 5 g 试样(精确至 0.01 g)于 50 mL 具塞塑料离心管中，准确加入内标溶液 100 μL 和 10 mL 乙酸-乙酸钠缓冲溶液，涡旋混匀，再加入 β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液 100μL，于 37 ℃士 1 ℃振荡酶解 12 h。取出冷却至室温，加入25 mL 甲醇超声提取 30 min，0 ℃〜4℃下 10000 r/min 离心10 min。将上清液转入洁净烧杯,加水 100 mL，混匀后待净化。

2.净化：

提取液以 2 mL/min〜3 mL/min 的速度上样于活化过的ENVI-Carb 固相萃取柱。将小柱减压抽干。再将活化好的氨基柱串接在 ENVI-Carb 固相萃取柱下方。用 6 mL 二氯甲烷-甲醇溶液(7 + 3,体积比）洗脱并收集洗脱液,取下 ENVI-Carb 小柱，再用 2 mL 二氯甲烷-甲醇溶液(7 + 3,体积比）洗氨基柱，洗脱液在微弱的氮气流下吹干，用 1 mL 0.1 %甲醇-水溶液溶解残渣,供仪器测定。

注意事项

1.. 乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH 5.2)的配制方法为：称取43.0 g 乙酸钠（NaAC.4H2O)，加入22 mL乙酸，用水溶解并定容到1000 mL，用乙酸调节pH到5.2。

2..加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37 ℃士 1 ℃振荡酶解 12 h，保证温度稳定，±1℃，时间足够，水解完全。

3. 甲醇-水溶液提取超声提取，冷冻离心，提高提取效率。

4. 固相萃取柱的上样速度应低于 2 mL/min〜3 mL/min。

5. 收集液氮吹时应控制温度保持在 40 ℃以下，切记不能提高温度以节省氮吹时间。调节适当的气流大小，防止气流过大，液体溅出。用氮气吹至近干，避免待测物被吹至过干残留于试管内壁，再次溶解不完全，影响回收率。