2020年国家农产品质量安全例行监测“水果蔬菜中68种农药及其代谢物残留量的测定”-LC-MS/MS和GC-MS/MS方法

本方法由中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所研发，主要针对现目前国家农产品质量安全例行监测涉及的68 种农药及其代谢物，此方法目标物与2019年例行监测相同，样品处理操作简便、分析效率高，能够快速分析测定水果蔬菜样品中的农药及其代谢物残留。同时附带QuSEL（Quick, Smart, Efficient Lab）多功能针式过滤器和平行研磨仪使用方法的视频，方便用户高效快速的完成样品粉碎制备及提取净化前处理。

适用于水果蔬菜中68种农药及其11种代谢物残留量的液相色谱-串联质谱和气相色谱-串联质谱快速测定。此方法对68种农药及其11种代谢物的回收率为60-120%，定量限为1-10mg/kg。

用1%乙酸乙腈或乙腈提取，基于QuSEL的多功能针式过滤器（MFF）快速净化，液相色谱-串联质谱结合气相色谱-串联质谱测定，采用基质匹配标样以外标法定量。

4.1    乙腈：99.9%，色谱纯。

4.2    甲醇：色谱纯。

4.3    乙酸：>99.5%，分析纯。

4.4    甲酸铵：色谱纯。

4.5    氯化钠：≥99.5%，分析纯。

4.6    提取盐包：QuSEL前处理产品

AOAC方法：内含6g无水硫酸镁，1.5g乙酸钠。

EN方法：内含4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸三钠二水合物、0.5g柠檬酸二钠倍半水合物。  

4.7    1%乙酸乙腈溶液：取5mL乙酸(4.3)，用乙腈(4.1)稀释至500mL。

4.8    5mM甲酸铵甲醇溶液：称取157.65mg甲酸铵(4.4)，用甲醇(4.2)溶解至500mL。

4.9    5mM甲酸铵水溶液：称取157.65mg甲酸铵(4.4)，用水溶解至500mL。

4.10  农药及代谢物混合标准溶液：56种LC-MS/MS检测农药混合标准溶液，23种GC-MS/MS检测农药混合标准溶液，浓度均为100.0mg/L，-20℃以下保存。

4.11  混合标准工作溶液：精密量取100.0mg/L的56种和23种农药及代谢物混合标准溶液(4.10)，用乙腈(4.1)分别稀释至10mg/L。

5.1   液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）

5.2   气相色谱－串联质谱仪：配有电子轰击电离源（EI）

5.3    天平：感量0.01g。

5.4    分析天平：感量0.00001g。

5.5    涡旋仪。

5.6    离心机：>转速4000r/min。

5.7   一次性注射器：2mL。

5.8   多功能针式过滤器：

QuSEL多功能针式过滤器使用方法视频

QuSEL多功能针式过滤器产品信息

AOAC方法：内含150mgMgSO₄、50mgPSA、50mgC₁₈的净化吸附剂，滤膜孔径0.22µm。（产品号：F-QuEChERS-AOAC3202）。

EN方法：内含150mgMgSO₄、25mgPSA、25mgC₁₈的净化吸附剂，滤膜孔径0.22µm。（产品号：F-QuEChERS-EN3102）。

参照相关标准方法用粉碎研磨仪将水果蔬菜样品均质制备（参考QUICLEARE0301平行研磨仪）。

QuSEL平行研磨仪操作视频

QuSEL平行研磨仪

7.1样品前处理

7.1.1方法1（AOAC方法）

准确称取15g（精确至0.01g）均质样品于50mL离心管中，加入15mL 1%乙酸乙腈（4.7），加入提取包P-QuEChERS-AOAC1202（4.6）后剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。用一次性注射器（5.7）取1mL上清液（再吸入1mL空气），匀速通过多功能针式过滤器F-QuEChERS-AOAC3202（5.8）至进样小瓶中（使液体逐滴流出），上机测定。

备注：

• 常规水果蔬菜：采用F-QuEChERS-AOAC3201，内含150mgMgSO₄、50mgPSA；

• 含色素的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-AOAC3206，内含150mgMgSO₄、50mgPSA、5mgGCB；

• 含脂肪和蜡质的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-AOAC3202，内含150mgMgSO₄、50mgPSA、50mgC₁₈；

• 含色素和脂肪的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-AOAC3203，内含150mgMgSO₄、50mgPSA、50mgC₁₈、5mgGCB。

  方法2（EN方法）

准确称取10g（精确至0.01g）均质样品于50mL离心管中，加入10mL乙腈（4.1），加入提取包P-QuEChERS-EN1101（4.6）后剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。用一次性注射器（5.7）取1mL上清液（再吸入1mL空气），匀速通过多功能针式过滤器F-QuEChERS-EN3102（5.8）至进样小瓶中（使液体逐滴流出），上机测定。

备注：

常规水果蔬菜：采用F-QuEChERS-EN3101，内含150mgMgSO₄、25mgPSA；

含色素的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-EN3106，内含150mgMgSO₄、25mgPSA、5mgGCB；

含脂肪和蜡质的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-EN3102，内含150mgMgSO₄、25mgPSA、25mgC₁₈；

含色素和脂肪的水果蔬菜：采用F-QuEChERS-EN3103，内含150mgMgSO₄、25mgPSA、25mgC₁₈、5mgGCB。

7.2标准曲线绘制

取空白试样按7.1处理方法制备空白基质溶液，然后准确量取适量56种和23种农药及其代谢物混合标准工作溶液（4.11），用空白基质溶液稀释配制成浓度为1µg/L、2µg/L、5µg/L、10µg/L、25µg/L、50µg/L、100µg/L、200µg/L的系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱和气相色谱-串联质谱测定。分别以68种农药及其代谢物的定量离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的基质匹配标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

7.3测定

7.3.1液相色谱-串联质谱参考条件

液相色谱参考条件

a)   色谱柱：XDB C18 ,  2.1×150mm，3.5μm，或性能相当者；

b)  流速：0.4mL/min；

c)   流动相：A为5mM甲酸铵水溶液，B为5mM甲酸铵甲醇溶液

d)  进样量：10µL；

流动相梯度洗脱程序见表1：

表1梯度洗脱程序

质谱参考条件

a)   离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)  扫描方式：正、负离子扫描；

c)   质谱扫描方式：多反应离子监测（MRM）

d)  离子源温度：550℃；

e)   离子源喷雾电压：5500V；

f)   气帘气：30psi；

g)  雾化气：60psi；

h)  干燥气：60psi；

i)     碰撞气：8psi；

参考监测离子参数情况见表2。

表2  56种化合物MRM特征离子参考质谱条件 

7.3.2气相色谱-串联质谱参考条件

气相色谱参考条件

a)   色谱柱：HP-5MSUI 30×0.25×0.25mm

b)  流速：1.0mL/min

c)   进样口温度：280℃

d)  升温程序：80℃（1min），40℃/min至200℃，5℃/min至240℃，12℃/min至320℃(5min)

e)   传输线温度：280℃

f)   离子源温度：280℃

参考监测离子参数情况见表

表3  23种化合物GC-MS/MS参数及保留时间 

附图：农药及其代谢物液相色谱-串联质谱特征离子色谱图（50μg/L） 

（农药及其代谢物的正离子扫描）

（氟虫腈及其代谢物的负离子扫描）

此方法中所有的前处理耗材和标准品

均由天津阿尔塔科技有限公司提供！

天津阿尔塔科技有限公司是由留美归国团队创办的国内具有标准品专业研发生产能力的国家级高新技术企业，美国 A Chemtek公司中国合作伙伴，获得了CNAS/ISO9001认证，致力于FirstStandard ® 有机标准品的研发、生产和推广，拥有种类齐全的食品、环境安全检测标准品逾万种，包括农药1600多种、兽药600多种、以及食品添加剂、毒素等纯品、单标、混标，并接受定制，提供完整质检报告与证书，可溯源。