玉米油中抗氧化剂的检测

2019-02-13 16:54:36 北京莱伯泰科仪器股份有限公司

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摘要：本文建立了GPC-HPLC检测法同时测定玉米油样品中特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）三种抗氧化剂的分析方法。GPC可有效去除玉米油中油脂等大分子物质，准确收集抗氧化剂，采用HPLC-UV检测器，检测波长为280nm，准确检测玉米油中抗氧化剂含量。凝胶净化方法简单，有效去除干扰物质，保护分析仪器；HPLC-UV检测结果准确，具有良好的标准曲线线性、重复性以及检测结果，该法可在18min内完成样品中3种物质的全部检测。

前言：

食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）为人工合成油溶性抗氧化剂，常用于添加在动植物油等人类食品中，防止油脂变坏，在食品中的使用量较少。本文采用LabTech AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统对植物油进行净化，根据分子排阻色谱原理可有效去除油脂等大分子干扰物质，准确收集抗氧化剂，采用HPLC法对其中含量进行检测，方法简单、快捷，不仅去除干扰峰对目标物的影响，同时可大大保护分析仪器系统，延长色谱柱使用寿命。

实验部分

仪器与试剂

AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统（莱伯泰科有限公司，美国波士顿）

LC600二元高压梯度高效液相色谱系统（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京）

EV331旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京）

标样：

特丁基对苯二酚（99.5%，迪马公司）

丁基羟基茴香醚（98%，迪马公司）

二丁基羟基甲苯（99.0%，迪马公司）

甲醇（色谱纯，Fischer公司）

乙酸乙酯（分析纯，北京化工厂）

环己烷（分析纯，北京化工厂）

乙酸（分析纯，北京化工厂）

1.2标样和样品处理

1.2.1标准溶液配制

TBHQ、BHA、BHT标准使用液（GPC）：准确称取TBHQ、BHA、BHT标准品各100mg（精确至0.1mg），用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至100mL，配置成1mg/mL的储备液，于4℃冰箱中避光保存。吸取10mL标准储备液于100mL容量瓶中，乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容，配置浓度为100μg/mL的标准使用液，于加标样品GPC净化回收率使用。现配现用。

TBHQ、BHA、BHT标准溶液（HPLC）：取TBHQ、BHA、BHT标准品各100mg用甲醇溶解并定容至100mL作为混合标样储备液。用甲醇稀释1mg/mL的标准储备液至浓度依次为10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的标准溶液，将其依次进样进行液相色谱检测，建立工作曲线。

1.2.2样品制备

混合均匀的玉米油，称取10g（精确至0.1mg），用乙酸乙酯：环己烷（1:1，体积比）准确定容至100.0mL为样品溶液，涡旋混合2min。

样品原液：取5mL混合溶液，用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至10mL容量瓶，3个样品平行。

加标样品：取5mL混合溶液，加1mL浓度为1mg/mL的标准使用液（GPC），用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至10mL容量瓶，3个样品平行。

1.2.3样品净化

将TBHQ、BHA、BHT标准使用液（GPC）、样品原液、加标样品经凝胶渗透色谱Autoclean净化，收集流出液，旋转蒸发浓缩至近干，用甲醇定容至2mL，进高效液相色谱分析。

GPC的参数设置：

溶剂：乙酸乙酯：环己烷=1:1（体积比）

流量：5mL/min

检测波长：254nm

收集范围：7.5min-17min

上样量：2mL

1.3检测仪器的检测条件

1.3.1色谱条件

高效液相色谱：

色谱柱：Labtech C18（250 mm X4.6 mm，5μm）

流速：0.8mL/min

流动相：A：甲醇，B：1%乙酸水溶液

梯度程序

检测波长：280nm

柱温：30℃

进样量：20 uL

结果与讨论

2.1混合标准品液相色谱图、重复性和标准曲线

2.1.1 混合标准品液相色谱图及出峰顺序

混合标准品色谱图（100μg/mL）

出峰顺序依次为：TBHQ、BHA、BHT

2.1.2 重复性计算

将浓度为100μg/mL的混合标准品进入高效液相色谱检测，连续5针平行，重叠色谱图如下图所示，并且计算出峰时间重复性RSD。

2.1.3混合标准品标准曲线

将浓度依次为10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的混合标准溶液，进样进行液相色谱检测，建立工作曲线。工作曲线见下图所示，线性方程和线性系数依次为：TBHQ：Y=-2717+1.71×104X，R2=0.9998；BHA：Y=3.458×104+1.777×104X，R2=0.9998；BHT：Y=2.413×104+1.142×104X，R2=0.9997。

2.2实际样品原液检测结果和加标样品回收率计算

2.2.1 标准品、样品原液和加标（100μg/mL）样品经GPC净化色谱图。

凝胶净化系统是根据分子体积的大小将干扰分析的大分子及小分子物质去除，同时收集待分析组分，从而达到样品净化的目的。从下图凝胶净化色谱图中分析得出：抗氧化剂的收集时间为7.5min-17min，在7.5min前大分子物质基本流出。故AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统可有效去除玉米油中大分子物质对抗氧化剂的干扰。

2.2.2 样品原液经GPC净化后HPLC检测结果

2.2.3加标样品（100μg/mL）经GPC净化后HPLC检测回收率计算

结论

本文建立了GPC净化-HPLC检测法测定玉米油中TBHQ、BHA、BHT三种抗氧化剂的分析方法。AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统可有效去除玉米油中大分子物质，保护分析仪器系统，同时得到稳定分析结果，加标样品回收率较高且稳定，RSD不超过2.5%。采用HPLC法进行结果检测，结果表明样品重复性高，TBHQ、BHA、BHT的RSD依次为0.128%、0.058%、0.119%，且标准曲线均具有优秀线性系数，R2为0.9998及0.9997。GPC-HPLC法检测玉米油中抗氧化剂的方法简单快速，回收率较高且稳定，检测结果准确，可用于快速检测，同时此法也为检测油脂食品中TBHQ、BHA、BHT三种抗氧化剂提供方法参考。

参考文献

1.GB/T 23373-2009 食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定

2.NY/T 1602-2008 植物油中叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定高效液相色谱法