六月宠粉| 你知道qPCR金标准——MIQE指南吗？

研究过程中开展qPCR实验，从样品到数据分析整个过程会出现许多的不确定度因素。发表qPCR相关的文章，如果缺乏足够的实验细节，会影响结果的可靠性和重复性。为了提高qPCR相关研究的有效性和质量，实现实验的可靠性、重复性，制定一套qPCR标准非常必要。

图片来源：GB/T42077-2022

2009年,由多名科学家联合制定的“The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments”发表于《Clinical Chemistry》,MIQE是一套描述评估qPCR实验所需的最少信息的指南, 需要完全披露所有试剂、序列和分析方法，以便其他研究人员能够复制结果。MIQE也是一套qPCR实验设计及数据报告实践指南以及与同事共享实验信息的标准, 该标准旨在确保发布的qPCR 研究有意义、准确，通过提供所有相关的实验条件和检测特征，帮助确保科学文献的完整性，促进实验室之间的一致性，并增加实验的透明度。

MIQE指南为qPCR文章发表作者提供了一套qPCR实验流程的“检查清单”，规定了获得可靠实验结果所需提供的关键实验参数和注意事项。 

1

实验设计：定义实验组和对照组、每个组的数量、该实验是在中心实验室还是PI实验室进行等等

2

样本：描述、样本处理量、处理程序等等

3

核酸抽提：方法和/或仪器、所用辅助试剂的来源、核酸定量等等

4

逆转录反应：完整的反应条件、RNA量和反应体积、逆转录酶及其浓度等等

5

qPCR靶基因信息：扩增子位置、序列比对、扩增子的二级结构分析等等

6

qPCR引物：引物序列、探针序列、引物制造商等等

7

qPCR反应条件：完整的反应条件、反应体积和模板量、添加剂（SYBR Green I、DMSO等）等等

8

qPCR结果确认：特异性、线性动态范围、检出限的证据等等

9

数据分析：分析软件、异常值的识别和处理、重复性（批内差异）等等

MIQE也提出了一些术语的标准，例如将定量实时PCR缩写为qPCR，逆转录-qPCR 为RT-qPCR，推荐使用“参考基因”而不是“管家基因”来称呼用于标准化的基因。

MIQE指南为qPCR实验提供了一套全面的最低信息要求，并为审稿人和期刊编辑提供一个公认的标准，用于评估待发表文章的质量。因此，使用这种广泛应用的方法将最终产生更一致、更有可比性和更可靠的数据，促进实验室之间的结果比较和交流，推动qPCR技术的广泛应用和发展。

2019年8月国际标准化组织ISO参考MIQE指南、不同文献和专家意见等制定了ISO20395:2019标准（Biotechnology—Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences — qPCR and dPCR  生物技术--评估核酸靶序列定量方法性能的要求--qPCR和dPCR），遵循该标准，研究人员和实验室可以评估和验证核酸靶序列定量方法qPCR和dPCR的性能，确保其准确性和可靠性，这有助于提高核酸定量结果的可靠性和可比性，促进生物技术研究和临床诊断的发展和应用。

2022年12月30日我国依据MIQE指南、ISO20395:2019发布了GB/T42077—2022国家标准文件，为研究机构及研发企业等提供了qPCR规范化的标准。

Applied Biosystems™ qPCR预混液和Taqman Assay遵循MIQE指南、ISO20395:2019标准及GB/T42077—2022国标的原则和理论。赛默飞提供必要的信息，让您选择正确的检测方法以达成实验目的并满足MIQE等规定的要求。

MIQE指南中提到：确定SYBR Green反应引物特异性对于保障数据质量和有效性至关重要。PowerTrack™ SYBR Green Master Mix等预混液具有高特异性，可缩短引物优化和重新设计时间，从而获得高质量的数据。

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参考资料：

1.Stephen A Bustin, Vladimir Benes, Jeremy A Garson, Jan Hellemans, Jim Huggett, Mikael Kubista, Reinhold Mueller, Tania Nolan, Michael W Pfaffl, Gregory L Shipley, Jo Vandesompele, Carl T Wittwer, The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments, Clinical Chemistry, Volume 55, Issue 4, 1 April 2009, Pages 611–622

2.ISO 20395:2019 Biotechnology — Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences — qPCR and dPCR

3.GB/T 42077-2022 （现行）生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法