2024-06-25 16:28:34, 韵翔光电 江阴韵翔光电技术有限公司
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当分子吸收其吸收带内的波长的光,然后发射其发射带内的较长波长的光时,产生荧光。例如,明亮的荧光分子(称为荧光团)可以附着到例如细胞膜中、大脑中或甚至DNA亚单位上的生物学重要分子上,其结构在荧光显微镜中变得可见,这使我们能够跟踪细胞在健康和疾病中的功能方式。荧光由于其极高的灵敏度、高特异性和使用简单而广泛应用于生物学、生物技术和医学。
荧光仪器包括的滤光片
荧光显微镜和大多数使用荧光的仪器,包括荧光显微镜,都依赖于光学滤光片。典型的显微镜有三个基本滤光片:激发滤光片(或激发器)、二向色分光镜(或二向色镜)和发射滤光片(或发射器)。这三个过滤器形成了所谓的“过滤器组”,并且通常安装在称为“过滤器立方体”的特殊组件中,该组件可以快速安装在显微镜中。
激发滤光片通常是带通滤光片,其被设计成仅通过将被荧光团吸收的那些光源波长,从而使其它荧光源的激发最小化,尤其是阻断荧光发射带中的激发光。
分色镜是一种边缘滤光片(通常通过较长波长的光并反射较短波长的光),以倾斜的入射角(通常为45°)使用,以有效地将激发带中的光重新定向到样品,并将发射带中的光传输到检测器。
发射片通常是一个带通滤光片,只允许荧光团发射的波长通过,并阻挡该波段以外的所有不需要的光,尤其是激发光。
激发滤光片与发射滤光片之间的主要区别是什么?激发滤光器让光进入以激发分子,而发射滤光器透射分子发射的光。
上述三个单独滤光片的最佳光学滤光片组阻挡不需要的激发光(包括UV和IR)以及不需要的发射光(包括自发荧光),以确保高信号和低背景。
上述滤光片组只能用于一个荧光团,因为它只有一个通带,分别用于激发和发射。例如,如果使用两个荧光团,则该组将需要具有两个通带,每个通带用于激发器、二色性和发射器。这些被称为多波段集合。
滤光片组的重要特征
所进行的实验类型通常决定了显微镜中应使用哪种类型的滤光片组:
高亮度:这种类型使检测到的信号最大化,甚至以较高的背景为代价。
高对比度:这种类型最大限度地提高明亮区域和背景之间的图像对比度,即高信号-背景比。
窄通带:当使用多个荧光团、减少串扰和/或降低背景信号时,窄通带确保仅捕获来自所需荧光团的所需信号。
宽通带:当使用弱发射荧光团或成像单分子时,更宽的通带允许更多的激发光到达样品并捕获更多的发射。
总之,滤光片组通常通过使用较窄或较宽的通带与中心波长放置相结合,在高亮度和高对比度之间取得平衡。
滤光片和滤光片组对荧光应用的优化
我们的团队在滤光片组的设计方面拥有丰富的经验和专业知识,并对每一组进行优化,以确保滤光片能够很好地协同工作。因此,我们的荧光滤光片和荧光滤光片组为基于荧光的光学平台的用户和开发者提供了许多关键优势。
我们的滤光片基于可制造的规格,这保证了滤光片与滤光片之间以及仪器与仪器之间出色的光谱一致性。
使用专有仪器测量生产滤光片的频谱性能,以达到最高保真度,该仪器可非常精确地测量陡峭的频谱边缘和深OD,并确保产生的频谱性能达到或超过指定性能。这些仪器包括Workhorse Peregrine平台和Koladeep™,前者克服了标准计量设备的高光谱分辨率和灵敏度限制,后者常规测量低至超过OD9的阻塞和相对于边缘波长陡于0.2%的边缘陡度。这使得我们能够在最苛刻的情况下提供有保证的性能,满足新一代精密荧光平台的需求。
可以通过精确的边缘放置来涂覆目录和定制的光学滤光片,这为关键的滤光片光谱边缘提供了行业低制造公差。
我们在业界领先的Avant™滤光片组中采用了所有这些优势,通过收集峰值发射范围内的发射信号并阻止激发串扰,增加了短斯托克斯位移(低“间隙”)荧光团的发射信号。
我们的旗舰产品Brightline®滤光片套件遵循荧光团使用趋势、光源创新和探测器增强。基于我们多年设计光学滤光片的经验,这些装置平衡了滤光片装置的需求和成本,并在广泛的荧光探针和显微镜应用中提供了装置性能。
使用荧光滤光片组的真实示例
荧光引导手术(FGS)使用光学滤光片来帮助外科医生在手术过程中观察器官或结构。在这个例子中,患者饮用了含有荧光团的液体,外科医生使用了一种特殊的可视化系统,该系统将光送入体内以激发荧光团。在照片中,绿色区域突出了一个解剖学上复杂的位置,外科医生精确地知道在哪里进行手术。如果没有FGS,这个病人的手术将是困难和危险的。
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